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免疫熒光技術的實驗步驟：

一、準備好試劑與儀器：

磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。

二、實驗步驟

1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標本片上，十分鐘后棄去，使標本保持一定濕度。

2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液，使其完全覆蓋標本，置于有蓋搪瓷盒內，保溫一定時間以三十分鐘為參考。

3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分鐘，并不停地搖晃振蕩。

4.取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。

5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
別    名  Apoptosis related cysteine protease; Apoptosis related cysteine protease; CASP 14; CASP-14; CASP14; Caspase 14 apoptosis related cysteine protease; Caspase 14 apoptosis related cysteine protease; Caspase 14 precursor; Caspase 14 precursor; Caspase-14 subunit p10; Caspase-14; Caspase-14; Caspase14; CASPE_HUMAN; MGC119079; MICE; MICE; Mini ICE; Mini ICE.

純化方法  affinity purified by Protein A

儲 存 液  Preservative: 15mM Soium zde, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4

產品應用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  ICC=1:100-500  IF=1:100-500 

產品名稱	半胱胺酸蛋白酶蛋白14抗體0.1ml/100μg0.2ml/200μg
英文名稱	Anti-Caspase 14
貨號	LZK65111

英文名稱  Anti-Caspase 14

中文名稱  半胱胺酸蛋白酶蛋白14抗體

濃    度  1mg/1ml

規 格  0.1ml/100μg  0.2ml/200μg

抗體來源  Rabbit

克隆類型  polyclonal

交叉反應  Human, Mouse, Rat, Guinea Pig

產品類型  一抗

研究領域  細胞生物 細胞凋亡

蛋白分子量  predicted molecular weight: 27kDa

性    狀  Lyophilized or Liquid

免 疫 原  KLH conjugated synthetic peptide derived from human Caspase 14

亞    型  IgG

抗體的制備過程：

1. 免疫原：普通的大分子蛋白，通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原；小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見偶聯載體如BSA、OVA、HAS等。

2. 免疫動物：常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量 時需要用到狗、綿羊、山羊等。

3. 免疫血清的收集：一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用采血，家兔、山羊、綿羊可采用采血。

4. 免疫血清的純化與鑒定：得到的抗血清需要進一步的純化，利用偶聯了抗原的親和柱進行層析，具有高效，特異性強，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。

5. 免疫血清的保存：抗體一般比較穩定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價，而真空干燥保存時間可以更久。聯祖保存前需經除菌并添加防腐劑。

 

 

抗體分子標記技術：

（一）原理

當應用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應。蛋白質分子可進行鹵化反應的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質液加入包被好的試管中,反應完成即將混合液移入他管終止反應。

（二）準備

1.試劑

經親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體；0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5；無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液；100g/L三醋酸；70%乙醇；新鮮制備的含2mg/m1絡胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5）；胺T反應終止緩沖液；

2.儀器

凝膠過濾柱；￥-記數器；玻璃纖維濾。

（三）操作要點

1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行；

2.如果氧化反應損傷蛋白質，可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯)胺T量減少到0.02mg/m，并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml；

3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年；

4.1251標記的抗體,在制備后六周內均可使用(1251的半衰期為59.6天）；

5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低；

6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結合位點有干擾,因此降低其結合能力,但這種情況很少見。

5-脲嘧啶標準品純度：97%Diosgenin  100mg

環丙羧標準品純度：≥99%Pseudoprotodioscin 1g

米龍醋酯標準品純度：≥98%Gracillin 100mg

米龍標準品純度：≥98%Protodioscin 25mg

熒光素標準品純度：≥98%Pedunculoside 10mg

醋輕松標準品純度：≥95%Ilexolic acid 5mg

醋膚輕松標準品純度：≥90%Ligustrazine Hydrochloride 1g

尼辛葡標準品純度：≥95%Tetramethylpyrazine 25mg

尼縮松標準品純度：≥97%Herbacetin 10mg

雙美松叔戊酯標準品純度：>98%Ailanthone 25mg

馬西尼相關物質C標準品純度：≥97%acevaltrate 10mg

馬西尼相關物質B標準品純度：98% Nerolidol 5mg

馬西尼標準品純度：97%Procyanidin A1 25mg

醋氫可的松標準品純度：98%Procyanidin A2 10mg

2-脫氧-2--D-葡萄糖標準品純度：≥97%Echinocystic acid  25mg
血小板衍生生長子可溶性受體α(PDGFsR-α)抗體  英文名稱：PDGFsR-α ELISA Kit，PDGFsR-α，

內皮細胞生長子(VEGF)抗體  英文名稱：VEGF ELISA Kit，VEGF，

血凝素(HA)抗體  英文名稱：HA ELISA Kit，HA，

性別決定區Y蛋白(SRY)抗體  英文名稱：SRY ELISA Kit，SRY，

纖維連接素相關抗原(FRA)抗體  英文名稱：FRA ELISA Kit，FRA，

細胞角蛋白19(CK-19)抗體  英文名稱：CK-19 ELISA Kit，CK-19，

尾肢同源蛋白2(PYGO2/PP7910)抗體  英文名稱：PYGO2/PP7910 ELISA Kit，PYGO2/PP7910，

突觸泡蛋白抗體(SYP-Ab)抗體  英文名稱：SYP-Ab ELISA Kit，SYP-Ab，

糖血紅蛋白(HbA1C)抗體  英文名稱：HbA1C ELISA Kit，HbA1C，

髓鞘堿性蛋白抗體(MBP)抗體  英文名稱：MBP ELISA Kit，MBP，

鼠嗜粒細胞趨子(ECF)抗體  英文名稱：ECF ELISA Kit，ECF，

dCMP脫氨酶(DCTD)抗體  英文名稱：DCTD ELISA Kit，DCTD，

B-細胞子9(Bcl9)抗體  英文名稱：Bcl9 ELISA Kit，Bcl9，

半胱胺酸蛋白酶蛋白14抗體0.1ml/100μg0.2ml/200μgCochlin蛋白(COCH)抗體  英文名稱：COCH ELISA Kit，COCH，

Atlastin3蛋白(ATL3)抗體  英文名稱：ATL3 ELISA Kit，ATL3，

ADP核糖轉移酶1(ART1)抗體  英文名稱：ART1 ELISA Kit，ART1，

Ⅰ類主要組織相容性復合體G(MHCG)抗體  英文名稱：MHCG ELISA Kit，MHCG，