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免疫熒光技術的實驗步驟：

一、準備好試劑與儀器：

磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。

二、實驗步驟

1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標本片上，十分鐘后棄去，使標本保持一定濕度。

2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液，使其完全覆蓋標本，置于有蓋搪瓷盒內，保溫一定時間以三十分鐘為參考。

3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分鐘，并不停地搖晃振蕩。

4.取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。

5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
別 名 CXC-chemokine receptor 2; CD 182; CD182; CD182 antigen; CDw128b; Chemokine (CXC) receptor 2; CMKAR2; CXCR 2; CXC R2; CXC-R2; CXCR2_HUMAN; C-X-C chemokine receptor type 2; CXCR-2; GRO/MGSA receptor; High affinity interleukin-8 receptor B; IL-8R B; IL-8 receptor type 2.

純化方法 affinity purified by Protein A

儲 存 液 Preservative: 15mM Soium zde, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4

產品應用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 Flow-Cyt=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:50-200

英文名稱 Anti-CXCR2

中文名稱 細胞表面趨化因子受體2抗體

濃 度 1mg/1ml

規 格 0.1ml/100μg 0.2ml/200μg

抗體來源 Rabbit

克隆類型 polyclonal

交叉反應 Human, Mouse, Rat

產品類型 一抗

研究領域 細胞生物 細胞周期蛋白 G蛋白偶聯受體 細胞分化 G蛋白信號

蛋白分子量 predicted molecular weight: 41kDa

性 狀 Lyophilized or Liquid

免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human CXCR2

亞 型 IgG

抗體的制備過程：

1. 免疫原：普通的大分子蛋白，通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原；小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見偶聯載體如BSA、OVA、HAS等。

2. 免疫動物：常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量 時需要用到狗、綿羊、山羊等。

3. 免疫血清的收集：一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用采血，家兔、山羊、綿羊可采用采血。

4. 免疫血清的純化與鑒定：得到的抗血清需要進一步的純化，利用偶聯了抗原的親和柱進行層析，具有高效，特異性強，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。

5. 免疫血清的保存：抗體一般比較穩定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價，而真空干燥保存時間可以更久。聯祖保存前需經除菌并添加防腐劑。

抗體分子標記技術：

（一）原理

當應用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應。蛋白質分子可進行鹵化反應的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質液加入包被好的試管中,反應完成即將混合液移入他管終止反應。

（二）準備

1.試劑

經親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體；0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5；無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液；100g/L三醋酸；70%乙醇；新鮮制備的含2mg/m1絡胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5）；胺T反應終止緩沖液；

2.儀器

凝膠過濾柱；￥-記數器；玻璃纖維濾。

（三）操作要點

1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行；

2.如果氧化反應損傷蛋白質，可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯)胺T量減少到0.02mg/m，并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml；

3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年；

4.1251標記的抗體,在制備后六周內均可使用(1251的半衰期為59.6天）；

5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低；

6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結合位點有干擾,因此降低其結合能力,但這種情況很少見。

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組蛋白，1g 進口/原裝 Rhodizonic acid sodium salt 規格：AR

組蛋白，250mg 進口/原裝 Rhodium solution 規格：1000μg/ml,溶劑:2.0Mol/L HCl

核酸組蛋白（小牛胸腺），1g 進口/原裝 Rhodiosin 規格：HPLC≥88%，標準品

核酸組蛋白（小牛胸腺），250mg 進口/原裝 Rhodionin 規格：HPLC≥95%，標準品

粘蛋白，100mg 進口/原裝 Rhodanine 規格：>98%,Ind Grade"

細胞表面趨化因子受體2抗體0.1ml/100μg0.2ml/200μg粘蛋白，500mg 進口/原裝Rhodamine B base 規格：>97%,BS

粘蛋白，1g 進口/原裝 Rhodamine B 規格：BS

粘蛋白，5g 進口/原裝 Rhodamine 6G 規格：BS

蛋白保護劑TY，100g 進口/原裝 Rhodamine 123 規格：用于熒光標記