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抗體的制備過程：

1. 免疫原：普通的大分子蛋白，聯(lián)祖通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原；小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。

2. 免疫動物：常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量 時需要用到狗、綿羊、山羊等。

3. 免疫血清的收集：一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采血，家兔、山羊、綿羊可采用采血。

4. 免疫血清的純化與鑒定：得到的抗血清需要進一步的純化，利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析，具有高效，特異性強，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。

5. 免疫血清的保存：抗體一般比較穩(wěn)定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價，而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。

別    名  C20orf112; C20orf113; Chromosome 20 open reading frame 112; CT112_HUMAN; Hypothetical protein LOC140688; Uncharacterized protein C20orf112.

純化方法  affinity purified by Protein A

儲 存 液  Preservative: 15mM Soium zde, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4

產(chǎn)品應用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  ICC=1:100-500  IF=1:100-500 

產(chǎn)品名稱	20號染色體開放閱讀框112抗體0.2ml/200μg
英文名稱	Anti-C20orf112
貨號	LZK64453

英文名稱  Anti-C20orf112

中文名稱  20號染色體開放閱讀框112抗體

濃    度  1mg/1ml

規(guī) 格  0.2ml/200μg

抗體來源  Rabbit

克隆類型  polyclonal

交叉反應  Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep

產(chǎn)品類型  一抗

研究領域  細胞生物 發(fā)育生物學 神經(jīng)生物學

蛋白分子量  predicted molecular weight: 47kDa

性    狀  Lyophilized or Liquid

免 疫 原  KLH conjugated synthetic peptide derived from human C20orf112

亞    型  IgG

免疫熒光技術的實驗步驟：

一、準備好試劑與儀器：

磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。

二、實驗步驟

1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標本片上，十分鐘后棄去，使標本保持一定濕度。

2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液，使其完全覆蓋標本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時間以三十分鐘為參考。

3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分鐘，并不停地搖晃振蕩。

4.取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。

5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。

 

抗體分子標記技術：

（一）原理

當應用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應。蛋白質(zhì)分子可進行鹵化反應的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應完成即將混合液移入他管終止反應。

（二）準備

1.試劑

經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體；0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5；無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液；100g/L三醋酸；70%乙醇；新鮮制備的含2mg/m1絡胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5）；胺T反應終止緩沖液；

2.儀器

凝膠過濾柱；￥-記數(shù)器；玻璃纖維濾。

（三）操作要點

1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行；

2.如果氧化反應損傷蛋白質(zhì)，可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m，并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml；

3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年；

4.1251標記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天）；

5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低；

6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結合位點有干擾,因此降低其結合能力,但這種情況很少見。

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