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免疫熒光技術(shù)的實(shí)驗(yàn)步驟：

一、準(zhǔn)備好試劑與儀器：

磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。

二、實(shí)驗(yàn)步驟

1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上，十分鐘后棄去，使標(biāo)本保持一定濕度。

2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其完全覆蓋標(biāo)本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時(shí)間以三十分鐘為參考。

3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過(guò)0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分鐘，并不停地?fù)u晃振蕩。

4.取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標(biāo)本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。

5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度。
別 名 Leucine rich repeat neuronal protein 4; Leucine rich repeats and calponin homology (CH) domain containing 4; Leucine-rich neuronal protein; LRN; LRRN1; LRRN4; PP14183; SAP25; Sin3 associated polypeptide, 25kDa; LRCH4_HUMAN.

純化方法 affinity purified by Protein A

儲(chǔ) 存 液 Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4

產(chǎn)品應(yīng)用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:50-200 

產(chǎn)品名稱	富含亮氨酸重復(fù)家庭蛋白4抗體0.2ml/200μg
英文名稱	Anti-LRCH4
貨號(hào)	LZK63894

英文名稱 Anti-LRCH4

中文名稱 富含亮氨酸重復(fù)家庭蛋白4抗體

濃 度 1mg/1ml

規(guī) 格 0.2ml/200μg

抗體來(lái)源 Rabbit

克隆類(lèi)型 polyclonal

交叉反應(yīng) Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Rabbit

產(chǎn)品類(lèi)型 一抗

研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 免疫學(xué)

蛋白分子量 predicted molecular weight: 73kDa

性 狀 Lyophilized or Liquid

免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human LRCH4

亞 型 IgG

抗體的制備過(guò)程：

1. 免疫原：普通的大分子蛋白，通過(guò)分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原；小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對(duì)該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見(jiàn)偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。

2. 免疫動(dòng)物：常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量 時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。

3. 免疫血清的收集：一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用采血，家兔、山羊、綿羊可采用采血。

4. 免疫血清的純化與鑒定：得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化，利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析，具有高效，特異性強(qiáng)，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對(duì)分子的質(zhì)量、純度以及特異性。

5. 免疫血清的保存：抗體一般比較穩(wěn)定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià)，而真空干燥保存時(shí)間可以更久。聯(lián)祖保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。

 

 

抗體分子標(biāo)記技術(shù)：

（一）原理

當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(shí)(NaI)遇強(qiáng)氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團(tuán)進(jìn)行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進(jìn)行鹵化反應(yīng)的基團(tuán)主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進(jìn)行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實(shí)驗(yàn)中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強(qiáng)揮發(fā)性的有機(jī)溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。

（二）準(zhǔn)備

1.試劑

經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體；0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5；無(wú)載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液；100g/L三醋酸；70%乙醇；新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5）；胺T反應(yīng)終止緩沖液；

2.儀器

凝膠過(guò)濾柱；￥-記數(shù)器；玻璃纖維濾。

（三）操作要點(diǎn)

1.用胺T法進(jìn)行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進(jìn)行；

2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì)，可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m，并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml；

3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年；

4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天）；

5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低；

6.酪氨酸的碘化偶爾會(huì)對(duì)抗原的抗體結(jié)合位點(diǎn)有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見(jiàn)。

滑膜細(xì)胞  規(guī)格：20mg  英文名稱Rat Glucose-dependent insulin-releasing polypeptide ELISA Kit

骨骼肌細(xì)胞  規(guī)格：10mg  英文名稱Rat Glucose-dependent insulin-releasing polypeptide ELISA Kit

真皮微內(nèi)皮細(xì)胞  規(guī)格：20mg  英文名稱Rat Corticoserone ELISA Kit

真皮淋巴上皮細(xì)胞  規(guī)格：20mg  英文名稱Rat Corticoserone ELISA Kit

胎兒細(xì)胞  規(guī)格：20mg  英文名稱Rat Cortisol ELISA Kit

新生兒細(xì)胞  規(guī)格：100mg  英文名稱Rat Cortisol ELISA Kit

細(xì)胞  規(guī)格：20mg  英文名稱Rat FX ELISA Kit

胎兒真皮成纖維細(xì)胞  規(guī)格：20mg  英文名稱Rat VIII-Ag ELISA Kit

*真皮成纖維細(xì)胞  規(guī)格：20mg  英文名稱Rat VIII-Ag ELISA Kit

真皮成纖維細(xì)胞  規(guī)格：20mg  英文名稱Rat FIX ELISA Kit

皮下脂肪細(xì)胞  規(guī)格：10mg  英文名稱Rat F IX ELISA Kit

內(nèi)臟脂肪細(xì)胞  規(guī)格：20mg  英文名稱Rat FII ELISA Kit

軟骨細(xì)胞  規(guī)格：20mg  英文名稱Rat FII ELISA Kit

表皮黑色素細(xì)胞  規(guī)格：20mg  英文名稱Rat F1＋2 ELISA Kit

破骨細(xì)胞  規(guī)格：20mg  英文名稱Rat thrombin receptor ELISA Kit
人內(nèi)皮型一合成酶3eNOS3定量檢測(cè)試劑盒 免疫測(cè)定

小鼠β淀粉樣蛋白40Aβ40定量檢測(cè)試劑盒 免疫測(cè)定

人α性糖蛋白αAGP定量檢測(cè)試劑盒 免疫測(cè)定

小鼠熱休克蛋白40Hsp40定量檢測(cè)試劑盒 免疫測(cè)定

人胰蛋白酶原激活肽TAPelisa 免疫測(cè)定

小鼠脂聯(lián)素ADP定量檢測(cè)試劑盒 免疫測(cè)定

人巨噬細(xì)胞集落刺激子(MCSF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T    

人巨噬細(xì)胞來(lái)源的趨子(MDC/CCL22)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T    

人巨噬細(xì)胞趨子(MCF)ELISA試劑盒 規(guī)格：96T/48T    

人巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α(MIP1α/CCL3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T    

人巨噬細(xì)胞炎性蛋白1β(MIP1β/CCL4)ELISA試劑盒 規(guī)格：96T/48T    

人巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T    

富含亮氨酸重復(fù)家庭蛋白4抗體0.2ml/200μg人巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α(MIP3α/CCL20)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T    兔素B2(TXB2)ELISA試劑盒   規(guī)格：96T/48T    

兔血清總補(bǔ)體(CH50)ELISA試劑盒   規(guī)格：96T/48T    

兔血清一(NO)ELISA試劑盒   規(guī)格：96T/48T    

兔血漿α顆粒膜蛋白(GMP140)ELISA試劑盒   規(guī)格：96T/48T