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免疫熒光技術(shù)的實(shí)驗(yàn)步驟：

一、準(zhǔn)備好試劑與儀器：

磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。

二、實(shí)驗(yàn)步驟

1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上，十分鐘后棄去，使標(biāo)本保持一定濕度。

2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其完全覆蓋標(biāo)本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時(shí)間以三十分鐘為參考。

3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分鐘，并不停地?fù)u晃振蕩。

4.取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標(biāo)本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。

5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度。
別 名 CC147_HUMAN; CCDC147; Coiled-coil domain-containing protein 147; Gm969; RGD1307961; bA127L20.4; bA127L20.5; bA554P13.1; FLJ35908; MGC126475; RP11-554P13.1; C10orf80.

純化方法 affinity purified by Protein A

儲(chǔ) 存 液 Preservative: 15mM Soium zde, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4

產(chǎn)品應(yīng)用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500 

英文名稱 Anti-CCDC147

中文名稱 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白147抗體

濃 度 1mg/1ml

規(guī) 格 0.2ml/200μg

抗體來源 Rabbit

克隆類型 polyclonal

交叉反應(yīng) Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep

產(chǎn)品類型 一抗

研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 免疫學(xué)

蛋白分子量 predicted molecular weight: 103kDa

性 狀 Lyophilized or Liquid

免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human CCDC147

亞 型 IgG

抗體的制備過程：

1. 免疫原：普通的大分子蛋白，通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原；小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。

2. 免疫動(dòng)物：常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量 時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。

3. 免疫血清的收集：一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用采血，家兔、山羊、綿羊可采用采血。

4. 免疫血清的純化與鑒定：得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化，利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析，具有高效，特異性強(qiáng)，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。

5. 免疫血清的保存：抗體一般比較穩(wěn)定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià)，而真空干燥保存時(shí)間可以更久。聯(lián)祖保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。

抗體分子標(biāo)記技術(shù)：

（一）原理

當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(shí)(NaI)遇強(qiáng)氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團(tuán)進(jìn)行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進(jìn)行鹵化反應(yīng)的基團(tuán)主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進(jìn)行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實(shí)驗(yàn)中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強(qiáng)揮發(fā)性的有機(jī)溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。

（二）準(zhǔn)備

1.試劑

經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體；0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5；無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液；100g/L三醋酸；70%乙醇；新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5）；胺T反應(yīng)終止緩沖液；

2.儀器

凝膠過濾柱；￥-記數(shù)器；玻璃纖維濾。

（三）操作要點(diǎn)

1.用胺T法進(jìn)行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進(jìn)行；

2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì)，可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m，并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml；

3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年；

4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天）；

5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低；

6.酪氨酸的碘化偶爾會(huì)對抗原的抗體結(jié)合位點(diǎn)有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。

覆盆子標(biāo)準(zhǔn)品  定做種屬檢測試劑盒/中藥材鑒定試劑盒 低溫 規(guī)格:100mg  英文名稱：

可樂定相關(guān)雜質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品  定做種屬檢測試劑盒/中藥材鑒定試劑盒 低溫 規(guī)格:25mg  英文名稱：Clonidine Related Compound A

碳鎂標(biāo)準(zhǔn)品  定做種屬檢測試劑盒/中藥材鑒定試劑盒 低溫 規(guī)格:2g  英文名稱：Magnesium Carbonate (AS)

氧肟標(biāo)準(zhǔn)品  定做種屬檢測試劑盒/中藥材鑒定試劑盒 低溫 規(guī)格:200mg  英文名稱：Acetohydroxamic Acid

奧西諾酯標(biāo)準(zhǔn)品  定做種屬檢測試劑盒/中藥材鑒定試劑盒 低溫 規(guī)格:500mg  英文名稱：

柳汞標(biāo)準(zhǔn)品  定做種屬檢測試劑盒/中藥材鑒定試劑盒 低溫 規(guī)格:500mg  英文名稱：Thimerosal

相關(guān)物質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品  定做種屬檢測試劑盒/中藥材鑒定試劑盒 低溫 規(guī)格:25mg  英文名稱：Lorazepam Related Compound D

甲氨蝶呤相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品  定做種屬檢測試劑盒/中藥材鑒定試劑盒 低溫 規(guī)格:75mg  英文名稱：

肉豆蔻標(biāo)準(zhǔn)品  定做種屬檢測試劑盒/中藥材鑒定試劑盒 低溫 規(guī)格:200mg  英文名稱：Myristic Acid

苷標(biāo)準(zhǔn)品  定做種屬檢測試劑盒/中藥材鑒定試劑盒 低溫 規(guī)格:250mg  英文名稱：Idoxuridine

ND白氨  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:NAcetyleDLeucine  含量:BR，99%

ND甘露糖  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:NAcetylDmannosamine  含量:BR，97%

ND脯氨  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:NAcetylDProline  含量:BR，98%

NLα氨基氫肉桂  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:NAcetylLphenylalanine  含量:BR，99%

NLα氨  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:NAcetylLalanine  含量:BR，98%

NL白氨  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:NAcetylLLeucine  含量:BR，99%

NL谷氨  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:NAcetylLGlutamicacid  含量:BR，99%

NL賴氨  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:NAcetylLlysine  含量:BR，97%

NL酪氨乙酯一水合物  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:ATEE  含量:BR，98%

NL脯氨  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:NAcetylLProline  含量:BR，99%
卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白147抗體0.2ml/200μg人神經(jīng)降壓素(NT)ELISA試劑盒 Radix puerariae葛根染料法PCR鑒定試劑盒   定做種屬檢測試劑盒/中藥材鑒定試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年2-4周

人神經(jīng)激肽B(NKB)ELISA試劑盒 Rhizoma cibotii狗脊染料法PCR鑒定試劑盒  定做種屬檢測試劑盒/中藥材鑒定試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年2-4周

人神經(jīng)激肽B(NKB)ELISA試劑盒 Fructus lycii枸杞子染料法PCR鑒定試劑盒   定做種屬檢測試劑盒/中藥材鑒定試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年2-4周

人強(qiáng)啡肽(Dyn)ELISA試劑盒Ramulus uncariae cum uncis鉤藤染料法PCR鑒定試劑盒      定做種屬檢測試劑盒/中藥材鑒定試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年2-4周

人強(qiáng)啡肽(Dyn)ELISA試劑盒Rhizoma drynariae骨碎補(bǔ)染料法PCR鑒定試劑盒  定做種屬檢測試劑盒/中藥材鑒定試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年2-4周

N-羥基-5-降冰片稀-2,3-二酰亞胺  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:HONB  含量:高純，99%

N-羥基丁二酰亞胺  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:NHS  含量:BR，99%

N-壬酰基-N-甲基葡萄糖胺  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:MEGA-9  含量:優(yōu)質(zhì)級(jí)

N-生物素羥基琥珀酰亞胺酯  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:NHS-Biotin  含量:FMP

N-叔丁芴甲氧羰基-L-脯氨酸  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:Fmoc-Pro-OH  含量:特純，99%

N-叔丁氧基羰基-L-纈氨酸  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:Boc-L-valine  含量:特純，99%

N-叔丁氧羰基-4-羥基-L-脯氨酸  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:Boc-L-Hydroxyproline  含量:BR，99%

N-叔丁氧羰基-D-苯丙氨酸  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:BOC-D-Phenylalanine  含量:BR，99%

N-叔丁氧羰基-D-苯甘氨酸  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:Boc-D-α-phenylglycine  含量:BR，98%

N-叔丁氧羰基-D-丙氨酸  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:BOC-D-Alanine  含量:BR，99%