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傳代方法：

產品僅用于科研收到細胞后，取出培養瓶在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況。

（一）如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，吸出培養液，僅留下10ml培養液在瓶內繼續培養。。

（二）如果細胞已長滿，即可進行傳代培養。具體步驟如下：

1. 棄去培養液，用PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，倒轉放于37度培養箱1-3分鐘預熱，然后又將培養瓶倒轉大約30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓分散，輕敲幾下培養培養瓶，細胞隨即脫落下來。

3. 加入6-8ml完全培養基，吸出，分到新的培養瓶中。一傳二。

注意：傳代后一半用我們的培養基，一半用你們的，以免細胞不適應而造成生長不好。

細胞名稱 小鼠雜交瘤細胞；IIB13

形態特性: 淋巴母細胞樣

生長特性: 半貼壁生長

特征特性: 可產生單抗體。

培養條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

傳代方法: 1:3傳代,2-3天傳一代

傳代情況: C20

凍存條件: 基礎培養基+8%DMSO+20%FBS

注意事項：

1.接收到細胞，肉眼觀察細胞培養基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。

2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。

3.嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶。

4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管完全吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養基培養細胞）。

5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。

6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。

7.換新的細胞培養瓶，37℃，5%CO2培養。

操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內完全解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。

6）產品僅用于科研觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
特別聲明：本產品及我公司所售其他產品均為科研類試劑產品，嚴禁用于藥物、醫療及其他非科研用途。

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