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細(xì)胞名稱 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞（拉祜族）；KM9406

形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性: 懸浮生長(zhǎng)

特征特性: 該細(xì)胞來(lái)源于一拉祜族男性的外周血。1994年由中國(guó)科學(xué)院昆明細(xì)胞庫(kù)通過(guò)EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。

培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)15%NBS

傳代方法: 1:2傳代；5-6天一次

傳代情況: P3

凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS

特別聲明：本產(chǎn)品及我公司所售其他產(chǎn)品均為科研類(lèi)試劑產(chǎn)品，嚴(yán)禁用于藥物、醫(yī)療及其他非科研用途。

傳代方法：

產(chǎn)品僅用于科研收到細(xì)胞后，取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。

（一）如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，僅留下10ml培養(yǎng)液在瓶?jī)?nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。。

（二）如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓分散，輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶，細(xì)胞隨即脫落下來(lái)。

3. 加入6-8ml完全培養(yǎng)基，吸出，分到新的培養(yǎng)瓶中。一傳二。

注意：傳代后一半用我們的培養(yǎng)基，一半用你們的，以免細(xì)胞不適應(yīng)而造成生長(zhǎng)不好。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）產(chǎn)品僅用于科研觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
注意事項(xiàng)：

1.接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。

2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。

3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。

5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。

6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。

7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

D-亮氨酸D-Leucine質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

D-亮氨酸甲酯鹽酸鹽D-Leucineester

D-綿子糖五水；蜜三糖五水D(+)-Raffinose17629-30-0

D-木糖(標(biāo)準(zhǔn)品)D-(+)-Xylose質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

D-木糖D-(+)-Xylose質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR

D-鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽D-Ornithine16682-12-5

D-蘋(píng)果酸(>98%，BR)D-Malic636-61-3

D-脯氨酸D-Proline質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

D-葡糖糖-6-磷酸二鈉二水D-Glucose-6-phosphate,dihydrate

D-葡萄糖-6-磷酸D-（+）-Glucopyranose56-73-5

D-葡萄糖醛酸D-Glucuronic1700908

D-葡萄糖醛酸鈉(>98%，BR)acid,

D-葡萄糖酸內(nèi)酯D-Gluconolactone質(zhì)量規(guī)格：>99%

D-葡萄糖無(wú)水D-Glucose質(zhì)量規(guī)格：>99.5%,分子生物學(xué)級(jí)

D-葡萄糖一水D-Glucose,14431-43-7
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞（拉祜族）；KM9406說(shuō)明書(shū)Acenaphthylene　苊烯（標(biāo)準(zhǔn)品）　質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

Diphenylguanidine　二苯胍（標(biāo)準(zhǔn)品）　質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

13-Acetyl-9-dihydrobaccatinIII　13-乙酰基-9-羥基巴卡丁III（標(biāo)準(zhǔn)品）　質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

Dihydrotanshinone　二氫丹參酮（標(biāo)準(zhǔn)品）　質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

Boronsolution　硼標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000μg/ml,溶劑：水）　質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

Boronsolution　硼標(biāo)準(zhǔn)溶液（100μg/mL,基體：水）　質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

Bismuthsolution　鉍標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000μg/ml,溶劑:1.5mol/LHNO3）　質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

Coppersolution　銅標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000mg/l,溶劑：1%硫酸）　質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

Coppersolution　銅標(biāo)準(zhǔn)溶液（500mg/l,溶劑:1%硫酸）　質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

Chromiumsolution　鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液（三價(jià)鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液1000μg/ml）　質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

Chromiumsolution　鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液（500mg/L,溶劑：水）　質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

Chromiumsolution　鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液（100μg/mL,基體：水）　質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

Cobaltstandard　鈷標(biāo)準(zhǔn)溶液（500mg/L,溶劑：1%鹽酸）　質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

Cobaltstandard　鈷標(biāo)準(zhǔn)溶液（100(20℃)μg/mL,基體:1%HNO3）　質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

Dysprosiumstandard　鏑標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000μg/ml）　質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)