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細(xì)胞名稱 突變型Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人細(xì)胞；HepG2-mCas9-723

形態(tài)特性: 上皮樣

生長特性: 貼壁生長

特征特性: 該細(xì)胞是采用慢病毒感染的方式使HepG2細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)突變型的Cas9蛋白，該蛋白可以降低基因編輯時(shí)的脫靶效率，經(jīng)2.0ug/mlPuromycin篩選得到的單，經(jīng)WesternBlotting驗(yàn)證該可以表達(dá)Cas9蛋白，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。

培養(yǎng)條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle＇sBalancedSalts)10%FBS；1%NEAA；2.0ug/mlPuromycin

傳代方法: 1:4~1：6傳代；每周2次。

傳代情況:

凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS

特別聲明：本產(chǎn)品及我公司所售其他產(chǎn)品均為科研類試劑產(chǎn)品，嚴(yán)禁用于藥物、醫(yī)療及其他非科研用途。

傳代方法：

產(chǎn)品僅用于科研收到細(xì)胞后，取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況。

（一）如果細(xì)胞未長滿，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，僅留下10ml培養(yǎng)液在瓶內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。。

（二）如果細(xì)胞已長滿，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓分散，輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶，細(xì)胞隨即脫落下來。

3. 加入6-8ml完全培養(yǎng)基，吸出，分到新的培養(yǎng)瓶中。一傳二。

注意：傳代后一半用我們的培養(yǎng)基，一半用你們的，以免細(xì)胞不適應(yīng)而造成生長不好。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）產(chǎn)品僅用于科研觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
注意事項(xiàng)：

1.接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。

2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。

3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。

5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。

6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。

7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

CRH(Mousecorticotropinreleasinghormone)ELISAKit小鼠促腎上皮質(zhì)激素釋放激素  規(guī)格：1g  

HISELISAKit大鼠組胺  規(guī)格：50mg  

PR3Ab(HumanProteinase3Antibody)ELISAKit人蛋白酶3抗體  規(guī)格：20mg  

SLA(HumanProteinase3Antibody)ELISAKit人抗肝可溶性抗原抗體  規(guī)格：50mg  

ISR-Beta(MouseInsulinReceptorBeta)ELISAKit小鼠胰島素受體β  規(guī)格：20mg  

IL-13ELISAKIT大鼠白介素13  規(guī)格：0.1ml  

IL-15ELISAKIT大鼠白介素15  規(guī)格：30mg  

GHbA1c(MouseGlycatedhemoglobinA1c)ELISAKit小鼠A1c  規(guī)格：20mg  

HumanBetaanti-galactanproteinsIgGELISAKit人β乳糖蛋白抗體IgG  規(guī)格：100mg  

IL-16ELISAKIT大鼠白介素16  規(guī)格：2mg/支  

EMAIgA(Humananti-EndomysialAntibodyIgA)ELISAKit人抗肌內(nèi)膜抗體IgA  規(guī)格：HPLC≥98%,20mg/支  

LFA-3/CD58(Mouselymphocytefunctionassociatedantigen3)ELISAKit小鼠淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3  規(guī)格：HPLC≥98%,20mg/支  

sPECAM-1/sCD31(Mousesolubleplateletendothelialcelladhesionmolecule1)ELISAKit小鼠可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1  規(guī)格：HPLC≥98%;5mg/支  

IL-17ELISAKIT大鼠白介素17  規(guī)格：HPLC≥98%,20mg/支  

GP(Humananti-glycoproteinantibody)ELISAKit人抗糖蛋白抗體  規(guī)格：HPLC≥98%,20mg/支  
突變型Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人細(xì)胞；HepG2-mCas9-723規(guī)格姜黃素458-37-7中文別名：姜黃色素  

英文名：Curcumin  

英文別名：Turmeric yellow, Diferuloylmethane  

CAS登錄號：458-37-7

分子式：C21H20O6

分子量：368.38

分子結(jié)構(gòu)：

外觀：橙黃色結(jié)晶性粉末

規(guī)格：20 mg/支

純度：≥ 98%

用途：用于含量測定/鑒定/藥理實(shí)驗(yàn)等。

提取來源：姜科植物姜黃（C.longa L.）根莖。

溶解性：不溶于水及, 溶于乙醇及。

熔點(diǎn)：183°

：反應(yīng)、抗氧化、抗類的作用。可以防止、，對、等又有效。

貯存條件： 4℃冷藏、密封、避光

有效期： 2年