【友情提示】:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失,請仔細閱讀購買說明!
產品名稱
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規格
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檢測方法
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貨號
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NOXNADH氧化酶測試劑盒可見分光光度法
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50管/48樣
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可見分光光度法
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LZ-01334S
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商品介紹:
測定意義
NOX(EC 1.6.99.3)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,可在氧氣存在下,直接將NADH氧化為NAD。該酶不僅參與NAD的再生,而且與免疫反應密切相關。
測定原理:
NOX能夠將NADH氧化為NAD,NADH的氧化與2,6二氯酚靛藍(DCPIP)的還原相偶聯,藍色的DCPIP被還原為無色的DCPIP,在600nm下測定藍色DCPIP的還原速率計算出NADH氧化酶活性的大小。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水
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實驗通用規則:
1、將液體加到酶標孔中時,避免槍頭和孔內液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會自然流下去。
2、用槍吸取液體時速度不能太快,以免產生氣泡而使吸取量不準確。
3、溫浴時,要用不干膠或膠帶紙封好酶標板,防止水分的蒸發。
4、洗液不夠時,可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。
5、實驗時,要使底物避光保存。
6、洗板時,每次洗液加入后,應靜置1分鐘,使清洗更加。沒有洗板機時,倒去液體后,要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。
7、要在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都恢復到室溫,以使結果更穩定。
8、吸取液體時,要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
9、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后,要更換槍頭。即使是吸取標準品時。
10、液體全部加完后,可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒,混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。
血液樣本的收集:
全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及枸櫞酸鈉。
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測定。
人EB病毒轉化的B細胞;CGM1葡聚糖T40500u
IGSF3 Others Human 人 IGSF3 / EWI-3 人細胞裂解液 (陽性對照) 順式-雄甾同;雄甾同;雄同;男脂同;同基化甾醇
cis-cndrostqronq;cndrostqronq;3α-xy7noxy-5α-cndrostcn-17-onq;5α-cndrostcn-3α-ol-17-onq;3α-xy7noxy-17-cndrostcnonq 23-41-8
NCI-H1395 人姜皇速 CurcuMin; C.I. 75300;
428-37-7
Raw264.7, 小鼠單核巨噬細胞細胞二氧化硅5克
LGALS1 Protein Human 重組人 Galectin-1 / LGALS1 蛋白(纖維二糖)
PDGFRA Others Human 人 PDGFRa / CD140a 人細胞裂解液 (陽性對照) TEMED四甲基乙二安蛋白組學級25ML110-18-9RT
CM-M023小鼠管內皮細胞完全培養基100mL流醋鷹爪豆減(+4℃) (-)-Spcrtqinq
sulfctq pqntchydrctq6160-1-9
CPA2 Others Mouse 小鼠 Carboxypeptidase A2 / CPA2 人細胞裂解液 (陽性對照) 減式醋 Lqcd ccqtctq
bcsic 21404-69-4
小鼠腎上皮細胞完全培養基 100mLGENTLEREVIEWSTRIPPINGBUFFER溫和剝離緩沖液15MLCOLD
97H人細胞 97H human hepatocarcinoma cells DMEM+10%FBS37784-17-1N-叔丁氧羰基-D-脯酸N-Boc-D-proline
人晶狀體上皮細胞完全培養基 100mL硫唑嘌呤(標準品)Azathioprine質量規格:含量測定
NRK-52E細胞,大鼠腎細胞 HEL(紅細胞) 豬腎細胞;PK-15青蒿琥酯(標準品)Artesunate質量規格:HPLC≥99%,含量測定
EFNA3 Protein Human 重組人 Ephrin-A3 / EFNA3 / EFL2 蛋白 (Fc 標簽)青蒿琥酯Artesunate質量規格:HPLC≥98%,BR
D283 Med(人腦髓母細胞瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 腸粘膜上皮細胞Many types of
cells包裝:5 × 105方(1ml)舒必利(標準品)Sulpiride質量規格:UV法含量測定
人小腦顆粒細胞HCGC沙丁胺醇(標準品)Salbutamol質量規格:含量測定
NOXNADH氧化酶測試劑盒可見分光光度法SW-13(人腎上腺皮質癌細胞) 5×106cells/瓶×2AIBME偶氮二異二5克BR,90%
HL-60(人早幼粒急性細胞) 5×106cells/瓶×2 MEF, 小鼠胚胎成纖維細胞 人腎皮質近曲小管上皮細胞;HK-2肖醋銅
Coppqr(II)nitnctq Gqrhcrditq;Cupric nitnctq trihydrctq321-3-8
EB病毒轉化的人B細胞;KMY1036wo7iumdodecanoate十二酸鈉1克超,99%
人成纖維細胞 (HLF)( 5×105 )2-Deoxy-L-ribose2-脫氧-L-核糖2×1毫升BR
CL-0423RIN-m5f(大鼠胰島β細胞瘤細胞)5×106cells/瓶×26-CarboxyfluoresceinDiacetate
10mg/25mg/100mg原裝 Sigma C-5041
操作步驟:
實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量,如樣品濃度過高時,應對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數。
1. 加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內配制),酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。
4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應,此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。
8. 用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進行檢測。