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上海聯(lián)祖生物科技有限公司
產(chǎn)品展廳
NADMDHNAD蘋果酸脫氫酶測(cè)試劑盒微量法
  • 品牌:聯(lián)祖
  • 產(chǎn)地:國(guó)產(chǎn)
  • 型號(hào):100管/96樣
  • 貨號(hào):LZ-01327S
  • 發(fā)布日期: 2020-11-29
  • 更新日期: 2025-01-10
產(chǎn)品詳請(qǐng)
產(chǎn)地 國(guó)產(chǎn)
品牌 聯(lián)祖
貨號(hào) LZ-01327S
用途 公司產(chǎn)品僅用于科研
英文名稱
包裝規(guī)格 100管/96樣
純度 %
CAS編號(hào)
別名 NAD蘋果酸脫氫酶(NADMDH)測(cè)試盒
分子式
是否進(jìn)口

【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。避免給您帶來(lái)不必要的損失,請(qǐng)仔細(xì)閱讀購(gòu)買說(shuō)明!

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

檢測(cè)方法

貨號(hào)

NADMDHNAD蘋果酸脫氫酶測(cè)試劑盒微量法

100管/96樣

微量法

LZ-01327S

商品介紹:

測(cè)定意義
MDH (EC1.1.1.37)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,線粒體中MDH是TCA循環(huán)的關(guān)鍵酶之一,催化蘋果酸形成草酰乙酸;相反,胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物, 連接多條重要的代謝途徑。因此,MDH在細(xì)胞多種生理活動(dòng)中扮演著重要的角色,包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性,MDH分為NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH,細(xì)菌中通常只含有NAD-MDH,在真核細(xì)胞中,NAD-MDH分布于細(xì)胞質(zhì)和線粒體中。

測(cè)定原理:

NAD-MDH催化NADH還原草酰乙酸生成蘋果酸,導(dǎo)致340nm處光吸收下降。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

實(shí)驗(yàn)通用規(guī)則:
1、將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí),避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會(huì)自然流下去。
2、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快,以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。
3、溫浴時(shí),要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板,防止水分的蒸發(fā)。
4、洗液不夠時(shí),可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長(zhǎng)期保存。
5、實(shí)驗(yàn)時(shí),要使底物避光保存。
6、洗板時(shí),每次洗液加入后,應(yīng)靜置1分鐘,使清洗更加。沒(méi)有洗板機(jī)時(shí),倒去液體后,要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上用力拍干。
7、要在實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都恢復(fù)到室溫,以使結(jié)果更穩(wěn)定。
8、吸取液體時(shí),要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
9、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后,要更換槍頭。即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)。
10、液體全部加完后,可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒,混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動(dòng)功能。

血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及枸櫞酸鈉。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測(cè)定。
SVEC4-10(小鼠結(jié)內(nèi)皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2奧美拉唑N-氧化物質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口Omeprazole N-Oxide

HDLEC-c 人類皮膚管內(nèi)皮細(xì)胞(HDLEC)來(lái)自成年捐獻(xiàn)者 500,000cells 頜下腺上皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)4-去甲氧基-4-硝基奧美拉唑硫化物質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口4-Desmethoxy-4-nitro Omeprazole Sulfide

視網(wǎng)膜微內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)5-羥基奧美拉唑鈉鹽質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口5-Hydroxy Omeprazole  Salt

GPA33 Others Human 人 GPA33 / Glycoprotein-A33 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 5-O-去甲基奧美拉唑硫化物質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口5-O-Desmethyl Omeprazole Sulfide

NRK 大鼠腎細(xì)胞奧氮平內(nèi)酰胺雜質(zhì)質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口Olanzapine Lactam Impurity
HFSF(人胚胎眼鞏膜成纖維細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2司盤85shēng huà shì jì容量:1克

hMoCD14+-PB single donorpre-screened Pellet 人類外周血CD14+單核細(xì)胞團(tuán)塊單一來(lái)源,預(yù)選型 > 1 mio.cells 人脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞RNAHA-sp miRNA5 μg蔗糖酶 Invertase 9001-57-4 250MG 通用試劑

CM-M010小鼠肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL異數(shù)李速 Isorhcmnqtin 480-19-3

KIAA1279 Others Human 人 KIAA1279 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) Theophylline1,3-二甲基2KU高,98%

腎系膜細(xì)胞培養(yǎng)基MCM555-06-6對(duì)基本鈉4-AMINOBENZOIC ACID wo7ium SALT
CRP Others Rat 大鼠 CRP / C-reactive 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 硫酸粘桿菌素(標(biāo)準(zhǔn)品)Colistin Sulphate質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定

HMF 人肌肉組織來(lái)源細(xì)胞鹽酸依氟鳥氨酸Eflornithine HCl質(zhì)量規(guī)格:>98%,水合物

CM-R019大鼠腮腺細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL色甘酸鈉Cromolyn 質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP32,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

RBE, 人肝細(xì)胞色甘酸鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)Cromolyn 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KMY1022 人神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL環(huán)孢菌素,環(huán)孢素A,環(huán)孢霉素ACyclosporine A質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
NADMDHNAD蘋果酸脫氫酶測(cè)試劑盒微量法BT-549(人管癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CM-M093小鼠胎兒真皮成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;LoVo皮質(zhì)甾酮,英文名或英文縮寫:Corticosterone,級(jí)別:CP,99%,規(guī)格:100克

EB病毒轉(zhuǎn)化的絨猴細(xì)胞;B95-8醋銻 cntimony triccqtctq 693-2-0

AMPK Others Human 人 AMPK (G1/B1/A1) Heteroimer 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) PROTEASEINHIBITORCOCKTAIL,BACTERIAL蛋白酶抑制劑混合物,細(xì)菌蛋白組學(xué)級(jí)白色粉末FROZENsigma

CL-0209SHZ-88(大鼠癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2偏硼酸,英文名或英文縮寫: borate monohydrate,級(jí)別:BR,98%,規(guī)格:500克

3T3-L1, 小鼠前脂肪細(xì)胞 小鼠細(xì)胞,HEPA1-6細(xì)胞 FO瘤細(xì)胞)AMVReverseTranscriptase 300u/1000u Promega原裝
操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過(guò)高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1.        加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4.        每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進(jìn)行檢測(cè)。

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