產地 | 進口、國產 |
品牌 | 聯祖 |
貨號 | LZR86013 |
用途 | 公司產品僅用于科研 |
包裝規格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
參數規格:
產品名稱:轉基因元件7S 3‘終止子PCR試劑盒供應商
貨號:LZR86013
產品規格:50次
產品運輸:低溫運輸
產品保存:-20℃保存
產品有效期:一年
產品特點:
產品僅用于科研本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
產品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
需要注意:
PCR反應液請在冰中配制,然后置于PCR反應儀上進行PCR反應。這種冷啟動法(Cool Start Method)與熱啟動法(Hot Start Method)相結合,更能有效地減少PCR過程中的非特異性反應,增強PCR擴增的特異性,能得到良好的PCR結果。
PCR的反應條件:
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環次數
根據模板DNA的量以及擴增片段的大小,設定25~30個循環。
如果循環次數太少,擴增量不足;如果循環次數太多,則會出現Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時,每kbp大體可設定30秒~1分鐘;當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時會得不到擴增產物;Anneal溫度太低時,容易發生非特異性反應。另外,Extension時間太短時,會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優成;而Extension時間太長時,會出現Smear。
使用方法
一、樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒DNAout。
2.如果有 N 個樣品,則需要做 N+2 個提取,包括一個陽性對照和一個陰性對照。陽性對照是在 200μL 水中加 10μL PCR 陽性對照作為陽性對照,陰性對照是直接用 200μL 水作為陰性對照。提取結束后,*得到 200μL 模板 DNA(每個樣品)放冰上待用,溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL,否則PCR 抑制物很可能會抑制 PCR。二、PCR(60 μL 體系)
3.樣品管:在 N+2 個PCR 管中加入下列成分:成分 N 個樣品管 陰性對照 陽性對照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物對 各 2 μL 2 μL 2 μL 樣品 DNA 模板 各 18 μL - - 陽性對照(純化后) - 18 μL - 陰性對照(純化后) - - 18 μL電泳檢測
4.取 10-20 μL PCR 產物直接進行瓊脂糖凝膠電泳(本產品不需要單獨加loading buffer),使用 100 bp DNA Marker,如果樣品為陽性,將會得到長度為 3582 bp 的擴增產物。
二反應的準備:
待各組份融化后先瞬時離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應體系,每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照,測試反應管可以有多個。配制過程中應注意無菌,戴口罩,并注意避免操作產生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風壓的設備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。
三、PCR反應:
降落PCR法(Touchdown PCR):94℃變性2分鐘;首循環:94℃變性30秒,68℃退火30秒,72℃延伸45秒;從八個循環開始,每循環退火溫度下降1℃,其余不變;從第九個循環開始,反應條件固定為:94℃變性30秒,60℃退火30秒,72℃延伸45秒,循環32次;循環結束后,在72℃延伸7分鐘,*保持在4℃。
卷柏(卷柏)英文名稱:Juan Bai (Juan Bai)雞抗肌內膜抗體IgA(EMA IgA)ELISA試劑盒 規格:2g保存:-20℃,避光
卷曲英文名稱:Capreomycin大鼠巨噬細胞替代激活相關學因子1(AmAC-1)ELISA試劑盒 規格:200mg保存:-20℃,避光
決明子英文名稱:Cassia seed人Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)ELISA試劑盒規格:0.5g保存:-20℃,避光
決明子(小決明)英文名稱:Cassia (Cassia tora L.)大鼠熱休克蛋白47(HSP47)ELISA試劑盒規格:0.5g保存:-20℃,避光
爵床英文名稱:Justicia人類白細胞抗原G(HLA-G)ELISA試劑盒規格:1g保存:-20℃,避光
堿英文名稱:Kaba choline人胎盤蛋白(PP)ELISA試劑盒 規格:30mg保存:-20℃,避光
卡多巴英文名稱:Cabi do Ba人激肽釋放酶10(KLK 10)ELISA試劑盒規格:100mg保存:-20℃,避光
卡鉑英文名稱:Carboplatin人同型半胱(Hcy)ELISA試劑盒規格:50mg保存:-20℃,避光
卡絡鈉英文名稱:Carbazochrome sodium sulfonate人髓系細胞觸發受體-1(TREM-1)ELISA試劑盒規格:50mg保存:-20℃,避光
卡馬西平英文名稱:C Masi Bing人血紅素氧合酶2(HO-2)ELISA試劑盒規格:100mg保存:-20℃,避光
卡莫氟英文名稱:Kamo人胎盤生長因子(PLGF)ELISA試劑盒規格:50mg保存:-20℃,避光
卡那英文名稱:Kanamycin大鼠抗IgE受體抗體ELISA試劑盒規格:200mg保存:-20℃,避光
卡那B英文名稱:Kanamycin B大鼠蛋白激酶B(PKB)ELISA試劑盒規格:50mg保存:-20℃,避光
卡前列英文名稱:Carboprost methylate人銅藍蛋白(CP/CER)ELISA試劑盒規格:30mg保存:-20℃,避光
卡托普利英文名稱:Kato Pury人透明質結合蛋白(HABP)ELISA試劑盒規格:100mg保存:-20℃,避光
6-Thioguanine,≥98%小鼠抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA) 進口/國產
Gefitinib,99%大鼠抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA) 進口/國產
2,5-Dihydroxyterephthalic acid,98%牛的牛血清白蛋白殘留檢測 進口/國產
Calcium dodecylbenzenesulfonate,98%人的牛血清白蛋白殘留檢測 進口/國產
Ferric pyrophosphate小鼠的牛血清白蛋白殘留檢測 進口/國產
11-Mercaptoundecanoic acid,95%大鼠的牛血清白蛋白殘留檢測 進口/國產
2-Diethylaminoethyl hexanoate,98%人β2糖蛋白1抗體IgG(β2-GP1 Ab IgG) 進口/國產
Phlorin (HPLC,≥98%)人β2糖蛋白1抗體IgM(β2-GP1 Ab IgM) 進口/國產
轉基因元件7S 3‘終止子PCR試劑盒供應商Botryosphaeria│dothidea (Moug.) Ces. & De Not.分離基物: 蘋果果實提供形式: 斜面培養物模式菌株: no培養基: 14生長條件: 25存儲條件: 定期移植法
Bacillus│thuringiensis分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養物;凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 生物殺蟲劑培養基: 2生長條件: 37℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
Micromonospora│sp.分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 抗恥垢分枝桿菌培養基: CM0027生長條件: 28C存儲條件: 真空冷凍干燥
Thielavia│sepedonium分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 分解纖維素培養基: 0014生長條件: 25-28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
博德特氏菌種屬: Bordetella│bronchiseptica提供形式: 斜面培養物安全等級: 2模式菌株: no應用領域: 測定多黏菌素B效價培養基: CM0119生長條件: 37℃存儲條件: -80℃冰箱凍結法
Streptococcus│suis分離基物: 豬料提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no應用領域: 用于科研培養基: 396生長條件: 37存儲條件: 真空冷凍干燥法;
Bacillus│subtilis分離基物: 豆豉提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 用于產纖溶酶的研究培養基: CM0002生長條件: 30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法
Clostridium│tetani提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no培養基: CM0121生長條件: 37℃存儲條件: 真空冷凍干燥法
分枝桿菌種屬: Mycobacterium│Mycobacterium goodii提供形式: 凍干物安全等級: 3模式菌株: no應用領域: 研究生長條件: 37存儲條件: 真空冷凍干燥法
標準操作步驟:
產品僅用于科研如非指出,所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。
1.液氮充分研磨樣品。
2.收集研磨成粉末的50mg樣品,置于1.5ml離心管中。
3.加入350μl65℃預熱的緩沖液IL,并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩,確保所有的組織團都分散均勻。
4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數次。
5.加入350μl氯仿,充分混勻,12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。
6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團或把組織碎片也一起轉移。
7.加入4μl RNase A,渦旋混勻。室溫放置2min。
8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無水乙醇,充分混勻。如:向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無水乙醇。
9.把上述混勻的液體轉移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結合DNA,棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請分兩次過柱。
10.將吸附柱重新套回收集管中,加入500μl緩沖液WB至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;
11.將吸附柱重新套回收集管中,加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;
注意:DNA Wash Buffer使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中,使用前須恢復到室溫。
12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,8,000×g離心1min,棄去流出液;
13.將吸附柱重新套回2ml收集管中,*轉速(>13000×g)離心空結合柱1min以干燥柱子的基質;這一步對下面的洗脫步驟至關重要。
14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管,加入50-150μl65℃預熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min;
15. 室溫下,離心(>13000)1min,以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲于-20℃。