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- 品牌：聯(lián)祖
- 產(chǎn)地：進口、國產(chǎn)
- 貨號：LZR86146
- 發(fā)布日期： 2020-11-26
- 更新日期： 2025-01-09
| 產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
| 品牌 | 聯(lián)祖 |
| 貨號 | LZR86146 |
| 用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50次 |
| 純度 | % |
| CAS編號 | |
| 是否進口 | 是 |
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：轉基因構建FMV啟動子-PVY基因PCR試劑盒說明書
貨號：LZR86146
產(chǎn)品規(guī)格：50次
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點：
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
產(chǎn)品特點：
◇高特異性：與其他病毒無交叉反應，無非特異性擴增；
◇高靈敏度：檢測靈敏度可達10~100拷貝；
◇操作簡便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時進行多個檢測；
◇高通量：多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
需要注意：
PCR反應液請在冰中配制，然后置于PCR反應儀上進行PCR反應。這種冷啟動法（Cool Start Method）與熱啟動法（Hot Start Method）相結合，更能有效地減少PCR過程中的非特異性反應，增強PCR擴增的特異性，能得到良好的PCR結果。
PCR的反應條件：
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小，設定25～30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設定30秒～1分鐘；當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現(xiàn)Smear。
使用方法
一、樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒DNAout。
2.如果有 N 個樣品，則需要做 N+2 個提取，包括一個陽性對照和一個陰性對照。陽性對照是在 200μL 水中加 10μL PCR 陽性對照作為陽性對照，陰性對照是直接用 200μL 水作為陰性對照。提取結束后，*得到 200μL 模板 DNA（每個樣品）放冰上待用，溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL，否則PCR 抑制物很可能會抑制 PCR。二、PCR（60 μL 體系）
3.樣品管：在 N+2 個PCR 管中加入下列成分：成分 N 個樣品管 陰性對照 陽性對照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物對 各 2 μL 2 μL 2 μL 樣品 DNA 模板 各 18 μL - - 陽性對照（純化后） - 18 μL - 陰性對照（純化后） - - 18 μL電泳檢測
4.取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物直接進行瓊脂糖凝膠電泳（本產(chǎn)品不需要單獨加loading buffer），使用 100 bp DNA Marker，如果樣品為陽性，將會得到長度為 3582 bp 的擴增產(chǎn)物。
二反應的準備：
待各組份融化后先瞬時離心，然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應體系，每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照，測試反應管可以有多個。配制過程中應注意無菌，戴口罩，并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染，推薦在有風壓的設備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。
三、PCR反應：
降落PCR法(Touchdown PCR)：94℃變性2分鐘;首循環(huán)：94℃變性30秒，68℃退火30秒，72℃延伸45秒;從八個循環(huán)開始，每循環(huán)退火溫度下降1℃，其余不變;從第九個循環(huán)開始，反應條件固定為：94℃變性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸45秒，循環(huán)32次;循環(huán)結束后，在72℃延伸7分鐘，*保持在4℃。
5水楊二水 含量：≥ 98% 規(guī)格：20 mg/支
5Sulfosalicylic acid, dihydrate 含量：≥ 98% 規(guī)格：20 mg/支
6芐氨嘌呤 含量：≥ 98% 規(guī)格：20 mg/支
6Benzyl Aminopurine 含量：≥ 98% 規(guī)格：20 mg/支
6羧二熒光素 含量：≥ 98% 規(guī)格：20 mg/支
6Carboxyfluorescein Diacetate 含量：≥ 98% 規(guī)格：20 mg/支
6羥多巴胺 含量：≥ 98% 規(guī)格：20 mg/支
6Hydroxydopamine Hydrobromide 含量：≥ 98% 規(guī)格：20 mg/支
異牡荊苷;Isovitexin with CAS號： 29702258 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢
右旋龍腦;Borneol CAS號： 507700 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢
油;cis9Octadecenoi CAS號： 112801 規(guī)格： 0.1ml 訂購|咨詢
酰纈草三;Acevaltratum CAS號： 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢
酰哈巴苷;8OAcetylharp CAS號： 6926143 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢
異型南五味子素;Heterocliti CAS號： 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢
洋艾素;Absinthin CAS號： 1362421 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢
α亞麻;alphaLinoleni CAS號： 463401 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢
龍腦;Bornyl acetate CAS號： 20347653 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢
亞麻;Gamma linolenic CAS號： 506263 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢
野漆樹苷;Rhoifolin CAS號： 17306466 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢
葉黃制菌素;Xanthatin CAS號： 26791731 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢
3南美楝屬二;Cabralea CAS號： 35833626 規(guī)格： 10mg 訂購|咨詢
酰二美味草素 A;Acetyldi CAS號： 94285220 規(guī)格： 10mg 訂購|咨詢
羽扇;Lupenone CAS號： 1617705 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢
Daminozide,99%小鼠蛋白激酶B(PKB) 進口/國產(chǎn)
Diphenylcarbazone,60%大鼠蛋白激酶B(PKB) 進口/國產(chǎn)
1-Acetyl-2-phenylhydrazine,≥98%人磷肌3激酶(PI3K) 進口/國產(chǎn)
Hydrazine dihydrochloride,≥98%小鼠磷肌3激酶(PI3K) 進口/國產(chǎn)
Benzoylhydrazine,98%大鼠磷肌3激酶(PI3K) 進口/國產(chǎn)
Maleic hydrazide,99%人白介素23(IL-23) 進口/國產(chǎn)
Isonicotinyl hydrazide,≥99%小鼠白介素23(IL-23) 進口/國產(chǎn)
2-Nitrophenylhydrazine,97%大鼠白介素23(IL-23) 進口/國產(chǎn)
轉基因構建FMV啟動子-PVY基因PCR試劑盒說明書福氏志賀氏菌種屬: Shigella│flexneri提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no應用領域: B 4a IV 3,4...培養(yǎng)基: CM0051生長條件: 37℃存儲條件: 真空冷凍干燥法
Talaromyces│sp.提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 產(chǎn)生Glauconic acid or Glaucanic acid培養(yǎng)基: CM0018生長條件: 28C存儲條件: -80℃冰箱凍結
Acetobacter│pasteurianus提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 釀造食醋。培養(yǎng)基: CM0809生長條件: 30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法
Saccharomyces│cerevisiae提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 舒氏日本面包酵母。培養(yǎng)基: CM0077生長條件: 28℃存儲條件: 真空冷凍干燥法；定期移植法
Pisolithus│tinctorius (Pers.) Coker & Couch分離基物: 組織塊提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 25存儲條件: 定期移植法
Rhizobium│loti Jarvis et al.分離基物: 大白擰條根瘤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 生物肥料培養(yǎng)基: 63生長條件: 29存儲條件: 定期移植法
Phoma│glomerata (Corda) Wollenw. & Hochapfel分離基物: 枝干提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 代謝產(chǎn)物培養(yǎng)基: 14生長條件: 25存儲條件: 定期移植法
Paecilomyces│gunnii提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 25℃存儲條件: -80℃冰箱凍結法；礦物油法；定期移植法
Monilinia│fructicola (G. Winter) Honey分離基物: 自然果提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 22－25存儲條件: 定期移植法
標準操作步驟：
產(chǎn)品僅用于科研如非指出，所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。
1.液氮充分研磨樣品。
2.收集研磨成粉末的50mg樣品，置于1.5ml離心管中。
3.加入350μl65℃預熱的緩沖液IL，并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩，確保所有的組織團都分散均勻。
4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數(shù)次。
5.加入350μl氯仿，充分混勻，12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。
6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團或把組織碎片也一起轉移。
7.加入4μl RNase A，渦旋混勻。室溫放置2min。
8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無水乙醇，充分混勻。如：向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無水乙醇。
9.把上述混勻的液體轉移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結合DNA，棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請分兩次過柱。
10.將吸附柱重新套回收集管中，加入500μl緩沖液WB至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；
11.將吸附柱重新套回收集管中，加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；
注意：DNA Wash Buffer使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中，使用前須恢復到室溫。
12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g離心1min,棄去流出液；
13.將吸附柱重新套回2ml收集管中，*轉速（>13000×g）離心空結合柱1min以干燥柱子的基質；這一步對下面的洗脫步驟至關重要。
14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管，加入50-150μl65℃預熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min；
15. 室溫下，離心(>13000)1min，以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲于-20℃。
