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上海聯祖生物科技有限公司
產品展廳
轉基因元件泛素基因啟動子染料法qPCR試劑盒供應商
  • 品牌:聯祖
  • 產地:進口、國產
  • 貨號:LZR86105
  • 發布日期: 2020-11-26
  • 更新日期: 2025-01-09
產品詳請
產地 進口、國產
品牌 聯祖
貨號 LZR86105
用途 公司產品僅用于科研
包裝規格 50次
純度 %
CAS編號
是否進口

參數規格:

產品名稱:轉基因元件泛素基因啟動子染料法qPCR試劑盒供應商

貨號:LZR86105

產品規格:50次

產品運輸:低溫運輸

產品保存:-20℃保存

產品有效期:一年

產品特點:

產品僅用于科研本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。

產品特點:

◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;

◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;

◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;

◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

 

需要注意:

PCR反應液請在冰中配制,然后置于PCR反應儀上進行PCR反應。這種冷啟動法(Cool Start Method)與熱啟動法(Hot Start Method)相結合,更能有效地減少PCR過程中的非特異性反應,增強PCR擴增的特異性,能得到良好的PCR結果。

PCR的反應條件:

因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。

◇ 循環次數

根據模板DNA的量以及擴增片段的大小,設定25~30個循環。

如果循環次數太少,擴增量不足;如果循環次數太多,則會出現Smear。

◇ Anneal以及Extension

合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時,每kbp大體可設定30秒~1分鐘;當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時會得不到擴增產物;Anneal溫度太低時,容易發生非特異性反應。另外,Extension時間太短時,會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優成;而Extension時間太長時,會出現Smear。

 

使用方法

一、樣品 DNA 的制備

1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒DNAout。

2.如果有 N 個樣品,則需要做 N+2 個提取,包括一個陽性對照和一個陰性對照。陽性對照是在 200μL 水中加 10μL PCR 陽性對照作為陽性對照,陰性對照是直接用 200μL 水作為陰性對照。提取結束后,*得到 200μL 模板 DNA(每個樣品)放冰上待用,溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL,否則PCR 抑制物很可能會抑制 PCR。二、PCR(60 μL 體系)

3.樣品管:在 N+2 個PCR 管中加入下列成分:成分 N 個樣品管 陰性對照 陽性對照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物對 各 2 μL 2 μL 2 μL 樣品 DNA 模板 各 18 μL - - 陽性對照(純化后) - 18 μL - 陰性對照(純化后) - - 18 μL電泳檢測

4.取 10-20 μL PCR 產物直接進行瓊脂糖凝膠電泳(本產品不需要單獨加loading buffer),使用 100 bp DNA Marker,如果樣品為陽性,將會得到長度為 3582 bp 的擴增產物。

二反應的準備:   

待各組份融化后先瞬時離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應體系,每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照,測試反應管可以有多個。配制過程中應注意無菌,戴口罩,并注意避免操作產生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風壓的設備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。   

三、PCR反應:   

降落PCR法(Touchdown PCR):94℃變性2分鐘;首循環:94℃變性30秒,68℃退火30秒,72℃延伸45秒;從八個循環開始,每循環退火溫度下降1℃,其余不變;從第九個循環開始,反應條件固定為:94℃變性30秒,60℃退火30秒,72℃延伸45秒,循環32次;循環結束后,在72℃延伸7分鐘,*保持在4℃。

鹽可樂定英文名稱:Clonidine hydrochloride人樣生長因子結合蛋白3(IGFBP-3)ELISA試劑盒規格:100mg保存:-20℃,避光

鹽克侖特羅英文名稱:Clenbuterol hydrochloride人樣生長因子結合蛋白2(IGFBP2)ELISA試劑盒規格:50mg保存:-20℃,避光

鹽那普利英文名稱:Quinapril hydrochloride人葡萄糖轉運蛋白1(GLUT1)ELISA試劑盒規格:100mg保存:-20℃,避光

鹽拉貝洛爾英文名稱:Labetalol hydrochloride人色酰tRNA合成酶(WARS)ELISA試劑盒規格:100mg保存:-20℃,避光

鹽賴英文名稱:Lysine hydrochloride大鼠c-jun ELISA試劑盒 規格:50mg保存:-20℃,避光

鹽雷莫司瓊英文名稱:Lei Mo Si Qiong hydrochloride人免疫球蛋白重鏈可變區(IgHV)ELISA試劑盒規格:100mg保存:-20℃,避光

鹽雷尼替丁英文名稱:Ranitidine hydrochloride人內皮細胞生長因子D(VEGF-D)ELISA試劑盒規格:100mg保存:-20℃,避光

鹽利多卡因英文名稱:Lidocaine hydrochloride人糖白蛋白(GA)ELISA試劑盒規格:100mg保存:-20℃,避光

鹽必利英文名稱:Tiapride hydrochloride人神經降壓素(NT)ELISA試劑盒 規格:50mg保存:-20℃,避光

鹽利達嗪英文名稱:Thioridazine hydrochloride人糖胺聚糖(GAG)ELISA試劑盒規格:50mg保存:-20℃,避光

鹽羅格列英文名稱:Rosiglitazone hydrochloride人免疫球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒規格:100mg保存:-20℃,避光

鹽羅哌卡因英文名稱:Ropivacaine hydrochloride人抗存活素抗體/生存蛋白(Surv)ELISA試劑盒規格:100mg保存:-20℃,避光

鹽羅哌卡因右旋體(鹽羅哌卡因雜質B)英文名稱:Ropivacaine hydrochloride dextroisomer (ropivacaine hydrochloride impurity B)人抗補體1q抗體(C1q)ELISA試劑盒 規格:20mg保存:-20℃,避光

鹽羅通定英文名稱:Luo Tongding hydrochloride人銜接蛋白酶活因子1(APAF1)ELISA試劑盒 規格:100mg保存:-20℃,避光

鹽洛哌丁胺英文名稱:Loperamide hydrochloride人維生素B6(VB6)ELISA試劑盒規格:50mg保存:-20℃,避光

2,3-Difluorotoluene,97%兔熱休克蛋白40(HSP-40) 進口/國產

4-Fluoro-2-nitrotoluene,98%雞熱休克蛋白70(HSP-70) 進口/國產

1-Bromo-2-(trifluoromethoxy)benzene,97%人熱休克蛋白70(HSP-70) 進口/國產

4-Fluoro-3-nitrotoluene,98%小鼠熱休克蛋白70(HSP-70) 進口/國產

2,3,4-Trifluorotoluene,99%豬熱休克蛋白70(HSP-70) 進口/國產

3-Fluoro-4-nitrotoluene,99%大鼠熱休克蛋白70(HSP-70) 進口/國產

2-Fluoro-6-nitrotoluene,98%兔熱休克蛋白70(HSP-70) 進口/國產

Formic acid,≥95%人舒緩激肽(BK) 進口/國產
轉基因元件泛素基因啟動子染料法qPCR試劑盒供應商Leptospirillum│ferrooxidans分離基物: 礦山酸性水中提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 生物浸礦培養基: 718生長條件: 30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

Aspergillus│terreus提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 辛伐他汀(simvastatin)是他汀類(statin)的藥物,用于控制血液中膽固醇的含量以及。辛伐他汀是土曲霉發酵產物的合成衍生物。培養基: 14生長條件: 28℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

Bordetella│bronchiseptica分離基物: 病料提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no應用領域: 研究培養基: 56生長條件: 37存儲條件: 真空冷凍干燥法;

Monilinia│fructicola (G. Winter) Honey分離基物: 自然果提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 14生長條件: 22-25存儲條件: 定期移植法

Streptomyces│erythrogriseus分離基物: 土壤/近海紅樹林土壤提供形式: 斜面培養物模式菌株: no應用領域: 可作抗菌活性及研究培養基: 12生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法

Pseudomonas│sp.分離基物: 污泥提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 分類、研究,具有用作耐重金屬基因資源潛力。培養基: 0065生長條件: 28℃存儲條件: -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法;礦物油法

Bacillus│anthracis分離基物: 炭疽馬皮提供形式: 凍干物安全等級: 3模式菌株: no應用領域: 抗炭疽血清及沉淀素血清培養基: 335生長條件: 37存儲條件: 真空冷凍干燥法;

Joostella│marina分離基物: 水樣/表層海水提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 污染物降解微生物/潛在石油烴類降解菌培養基: 821生長條件: 25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法

Curvularia│lunata提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 0014生長條件: 25℃
標準操作步驟:

產品僅用于科研如非指出,所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

1.液氮充分研磨樣品。

2.收集研磨成粉末的50mg樣品,置于1.5ml離心管中。

3.加入350μl65℃預熱的緩沖液IL,并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩,確保所有的組織團都分散均勻。

4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數次。

5.加入350μl氯仿,充分混勻,12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。

6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團或把組織碎片也一起轉移。

7.加入4μl RNase A,渦旋混勻。室溫放置2min。

8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無水乙醇,充分混勻。如:向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無水乙醇。

9.把上述混勻的液體轉移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結合DNA,棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請分兩次過柱。

10.將吸附柱重新套回收集管中,加入500μl緩沖液WB至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;

11.將吸附柱重新套回收集管中,加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;

注意:DNA Wash Buffer使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中,使用前須恢復到室溫。

12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,8,000×g離心1min,棄去流出液;

13.將吸附柱重新套回2ml收集管中,*轉速(>13000×g)離心空結合柱1min以干燥柱子的基質;這一步對下面的洗脫步驟至關重要。

14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管,加入50-150μl65℃預熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min;

15. 室溫下,離心(>13000)1min,以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲于-20℃。


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