產地 | 進口、國產 |
品牌 | 聯祖 |
貨號 | LZR86095 |
用途 | 公司產品僅用于科研 |
包裝規格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
產品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
參數規格:
產品名稱:轉基因元件tml3終止子LAMP試劑盒價格
貨號:LZR86095
產品規格:50次
產品運輸:低溫運輸
產品保存:-20℃保存
產品有效期:一年
產品特點:
產品僅用于科研本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
需要注意:
PCR反應液請在冰中配制,然后置于PCR反應儀上進行PCR反應。這種冷啟動法(Cool Start Method)與熱啟動法(Hot Start Method)相結合,更能有效地減少PCR過程中的非特異性反應,增強PCR擴增的特異性,能得到良好的PCR結果。
PCR的反應條件:
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環次數
根據模板DNA的量以及擴增片段的大小,設定25~30個循環。
如果循環次數太少,擴增量不足;如果循環次數太多,則會出現Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時,每kbp大體可設定30秒~1分鐘;當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時會得不到擴增產物;Anneal溫度太低時,容易發生非特異性反應。另外,Extension時間太短時,會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優成;而Extension時間太長時,會出現Smear。
使用方法
一、樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒DNAout。
2.如果有 N 個樣品,則需要做 N+2 個提取,包括一個陽性對照和一個陰性對照。陽性對照是在 200μL 水中加 10μL PCR 陽性對照作為陽性對照,陰性對照是直接用 200μL 水作為陰性對照。提取結束后,*得到 200μL 模板 DNA(每個樣品)放冰上待用,溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL,否則PCR 抑制物很可能會抑制 PCR。二、PCR(60 μL 體系)
3.樣品管:在 N+2 個PCR 管中加入下列成分:成分 N 個樣品管 陰性對照 陽性對照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物對 各 2 μL 2 μL 2 μL 樣品 DNA 模板 各 18 μL - - 陽性對照(純化后) - 18 μL - 陰性對照(純化后) - - 18 μL電泳檢測
4.取 10-20 μL PCR 產物直接進行瓊脂糖凝膠電泳(本產品不需要單獨加loading buffer),使用 100 bp DNA Marker,如果樣品為陽性,將會得到長度為 3582 bp 的擴增產物。
二反應的準備:
待各組份融化后先瞬時離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應體系,每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照,測試反應管可以有多個。配制過程中應注意無菌,戴口罩,并注意避免操作產生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風壓的設備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。
三、PCR反應:
降落PCR法(Touchdown PCR):94℃變性2分鐘;首循環:94℃變性30秒,68℃退火30秒,72℃延伸45秒;八個循環開始,每循環退火溫度下降1℃,其余不變;從第九個循環開始,反應條件固定為:94℃變性30秒,60℃退火30秒,72℃延伸45秒,循環32次;循環結束后,在72℃延伸7分鐘,*保持在4℃。
標準操作步驟:
產品僅用于科研如非指出,所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。
1.液氮充分研磨樣品。
2.收集研磨成粉末的50mg樣品,置于1.5ml離心管中。
3.加入350μl65℃預熱的緩沖液IL,并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩,確保所有的組織團都分散均勻。
4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數次。
5.加入350μl氯仿,充分混勻,12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。
6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團或把組織碎片也一起轉移。
7.加入4μl RNase A,渦旋混勻。室溫放置2min。
8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無水乙醇,充分混勻。如:向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無水乙醇。
9.把上述混勻的液體轉移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結合DNA,棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請分兩次過柱。
10.將吸附柱重新套回收集管中,加入500μl緩沖液WB至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;
11.將吸附柱重新套回收集管中,加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;
注意:DNA Wash Buffer使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中,使用前須恢復到室溫。
12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,8,000×g離心1min,棄去流出液;
13.將吸附柱重新套回2ml收集管中,轉速(>13000×g)離心空結合柱1min以干燥柱子的基質;這一步對下面的洗脫步驟至關重要。
14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管,加入50-150μl65℃預熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min;
15. 室溫下,離心(>13000)1min,以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲于-20℃。
新英文名稱:Neomycin大鼠抗IVIgG抗體ELISA試劑盒規格:200mg保存:-20℃,避光
新補骨脂異黃英文名稱:Neobavaisoflavone兔子內皮素1(ET-1)ELISA試劑盒規格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光
新橙皮苷英文名稱:Neohesperidin小鼠生長抑素(SS)ELISA試劑盒規格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光
新橙皮苷二查爾英文名稱:New hesperidin chalcone two hydrogen小鼠視黃結合蛋白4(RBP-4)ELISA試劑盒 規格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光
新莪術二英文名稱:New zedoary two ketone小鼠核心抗體(HBcAb)ELISA試劑盒 規格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光
新綠原英文名稱:Green original acid小鼠白三C4(LTC4)ELISA試劑盒規格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光
新芒果苷英文名稱:New mangiferin小鼠細胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA試劑盒規格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光
新霉胺英文名稱:Neamine大鼠質金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)ELISA試劑盒規格:80mg保存:-20℃,避光
新藤黃英文名稱:Neo gambogic acid兔血清總補體(CH50)ELISA試劑盒規格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光
新烏頭英文名稱:New Aconitine小鼠熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA試劑盒規格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光
新魚腥草素鈉英文名稱:Sodium New Houttuyfonate人神經保護因子(CVNPF)ELISA試劑盒 規格:100mg保存:-20℃,避光
杏葉防風英文名稱:Apricot Leaves wind大鼠游離β絨毛膜激素(f-βCG)ELISA試劑盒規格:6g保存:-20℃,避光
胸腺嘧英文名稱:Thymine大鼠Ⅰ型膠原交聯羧末端肽(ⅠCTP)ELISA試劑盒 規格:100mg保存:-20℃,避光
胸腺肽a1(套)英文名稱:Thymosin A1 (set)大鼠L選擇素(L-Selectin/CD62L)ELISA試劑盒規格:2mg保存:-20℃,避光
胸腺肽分子量標準英文名稱:Thymic peptide molecular weight standard大鼠N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(NAG)ELISA試劑盒規格:2mg/支保存:-20℃,避光
Phenylacetaldehyde,≥95%大鼠主要組織相容性復合體Ⅰ類(MHCⅠ/H-1Ⅰ)進口/國產
p-Anisaldehyde,98%兔主要組織相容性復合體Ⅰ類(MHCⅠ/RLAⅠ)進口/國產
Butyraldehyde,≥99.0%恒河猴主要組織相容性復合體(MHC/RhLA) 進口/國產
Dodecyl aldehydeM,92%人核因子κB受體活因子配(RANKL) 進口/國產
3,4-Dimethoxybenzaldehyde,99%倉鼠核因子κB受體活因子配(RANKL) 進口/國產
2,5-Dichlorobenzaldehyde,96%小鼠核因子κB受體活因子配(RANKL) 進口/國產
4-Diethylaminobenzaldehyde,99%大鼠核因子κB受體活因子配(RANKL) 進口/國產
2,4-Dinitrobenzaldehyde,97%人apelin 12(AP12) 進口/國產
轉基因元件tml3終止子LAMP試劑盒價格普羅菲登斯菌種屬: Providencia│sp.提供形式: 其他安全等級: 3模式菌株: no應用領域: 3 3培養基: CM0051生長條件: 37℃存儲條件: -80℃冰箱凍結法
Yarrowia│lipolytica分離基物: 生物樣/紋魚鰓提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 共生微生物/魚類共生菌培養基: 513生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法
Bacillus│subtilis分離基物: 砂土提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 33生長條件: 37℃存儲條件: -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
Lactobacillus│plantarum分離基物: 污泥提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 33生長條件: 37℃存儲條件: -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
桃吉爾霉種屬: Gilbertella│persicaria提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 0014生長條件: 25-28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
Gibberella│zeae提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 0014生長條件: 25℃
Bacillus│thuringiensis分離基物: 粉塵提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 分類、研究對比參考菌株培養基: 266生長條件: 28-30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法
斯氏油脂酵母種屬: Lipomyces│starkeyi提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no培養基: CM0077生長條件: 28-30℃存儲條件: -80℃冰箱凍結法;定期移植法
Streptosporangium│sp.分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: ;抗白色念珠菌培養基: CM0038生長條件: 28C存儲條件: -80℃冰箱凍結