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參數規格：

產品名稱：轉基因元件tg7染料法熒光定量PCR試劑盒供應商

貨號：LZR86093

產品規格：50次

產品運輸：低溫運輸

產品保存：-20℃保存

產品有效期：一年

產品特點：

產品僅用于科研本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。

產品特點：

◇高特異性：與其他病毒無交叉反應，無非特異性擴增；

◇高靈敏度：檢測靈敏度可達10~100拷貝；

◇操作簡便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時進行多個檢測；

◇高通量：多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

需要注意：

PCR反應液請在冰中配制，然后置于PCR反應儀上進行PCR反應。這種冷啟動法（Cool Start Method）與熱啟動法（Hot Start Method）相結合，更能有效地減少PCR過程中的非特異性反應，增強PCR擴增的特異性，能得到良好的PCR結果。

PCR的反應條件：

因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。

◇ 循環次數

根據模板DNA的量以及擴增片段的大小，設定25～30個循環。

如果循環次數太少，擴增量不足；如果循環次數太多，則會出現Smear。

◇ Anneal以及Extension

合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設定30秒～1分鐘；當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產物；Anneal溫度太低時，容易發生非特異性反應。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優成；而Extension時間太長時，會出現Smear。

使用方法

一、樣品 DNA 的制備

1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒DNAout。

2.如果有 N 個樣品，則需要做 N+2 個提取，包括一個陽性對照和一個陰性對照。陽性對照是在 200μL 水中加 10μL PCR 陽性對照作為陽性對照，陰性對照是直接用 200μL 水作為陰性對照。提取結束后，*得到 200μL 模板 DNA（每個樣品）放冰上待用，溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL，否則PCR 抑制物很可能會抑制 PCR。二、PCR（60 μL 體系）

3.樣品管：在 N+2 個PCR 管中加入下列成分：成分 N 個樣品管 陰性對照 陽性對照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物對 各 2 μL 2 μL 2 μL 樣品 DNA 模板 各 18 μL - - 陽性對照（純化后） - 18 μL - 陰性對照（純化后） - - 18 μL電泳檢測

4.取 10-20 μL PCR 產物直接進行瓊脂糖凝膠電泳（本產品不需要單獨加loading buffer），使用 100 bp DNA Marker，如果樣品為陽性，將會得到長度為 3582 bp 的擴增產物。

二反應的準備： 　　

待各組份融化后先瞬時離心，然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應體系，每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照，測試反應管可以有多個。配制過程中應注意無菌，戴口罩，并注意避免操作產生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染，推薦在有風壓的設備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。 　　

三、PCR反應： 　　

降落PCR法(Touchdown PCR)：94℃變性2分鐘;首循環：94℃變性30秒，68℃退火30秒，72℃延伸45秒;從八個循環開始，每循環退火溫度下降1℃，其余不變;從第九個循環開始，反應條件固定為：94℃變性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸45秒，循環32次;循環結束后，在72℃延伸7分鐘，*保持在4℃。

甘油溶液英文名稱：Nitroglycerin solution人纖連蛋白(FN)ELISA試劑盒規格：1.0ml保存：-20℃，避光

鉀英文名稱：Potassium nitrate人熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA試劑盒規格：100mg保存：-20℃，避光

胺英文名稱：Thiamine nitrate人維生素D2(VD2)ELISA試劑盒規格：50mg保存：-20℃，避光

毛果蕓香堿英文名稱：Pilocarpine nitrate人生成素2(ANG-2)ELISA試劑盒規格：50mg保存：-20℃，避光

咪康唑英文名稱：Miconazole nitrate人小扁豆素結合型胎蛋白/胎蛋白異質體1(AFP-L1)ELISA試劑盒規格：100mg保存：-20℃，避光

異山梨英文名稱：Isosorbide dinitrate人細胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)ELISA試劑盒 規格：100mg保存：-20℃，避光

益康唑英文名稱：Econazole nitrate人腺相關病毒(AAV)ELISA試劑盒規格：100mg保存：-20℃，避光

小白菊內英文名稱：Parthenolide小鼠抗平滑肌抗體(ASMA)ELISA試劑盒規格：HPLC≥98% 20mg/支保存：-20℃，避光

小檗紅堿英文名稱：Berberrubine人組織因子途徑抑制物(TFPI)ELISA試劑盒規格：HPLC≥98% 20mg/支保存：-20℃，避光

小檗堿（黃連素）英文名稱：Berberine (berberine)小鼠組織蛋白去乙酰酶(HD)ELISA試劑盒規格：HPLC≥98% 20mg/支保存：-20℃，避光

小檗皮英文名稱：Barberry bark人Apelin 36(AP36)ELISA試劑盒規格：1g保存：-20℃，避光

小豆蔻明英文名稱：Alpinetin人二嘧酶樣2(DPYSL2)ELISA試劑盒規格：20mg保存：-20℃，避光

小豆蔻明、豆蔻素、小豆蔻查耳英文名稱：Cardamonin, nutmeg, cardamom chalcone pigment兔載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA試劑盒 規格：HPLC≥98% 20mg/支保存：-20℃，避光

小茴香英文名稱：Fennel人可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA試劑盒規格：1g保存：-20℃，避光

小茴香油英文名稱：Fennel oil人促睡眠肽(DSIP)ELISA試劑盒規格：0.2ml保存：-20℃，避光

(E)-2-Octenal,≥94%小鼠疊胸苷(AZT) 進口/國產

Acetal,≥98%大鼠疊胸苷(AZT) 進口/國產

Heptaldehyde,≥92%人多巴胺(DA) 進口/國產

Polyvinyl butyral小鼠多巴胺(DA) 進口/國產

4-Pyridinecarboxaldehyde,97%大鼠多巴胺(DA) 進口/國產

2-Pyridinecarboxaldehyde,99%人促狀腺激素受體抗體(TSHR) 進口/國產

p-Fluoro benzaldehyde,98%小鼠高靈敏度促狀腺激素(U-TSH) 進口/國產

p-Tolualdehyde,≥97%大鼠高靈敏度促狀腺激素(U-TSH) 進口/國產
轉基因元件tg7染料法熒光定量PCR試劑盒供應商Pleiochaeta│sp.分離基物: 根提供形式: 凍結物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 抗大腸桿菌培養基: MEA生長條件: 25C存儲條件: -80℃冰箱凍結；礦物油法

美味牛肝菌種屬: Boletus│edulis提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 食用。培養基: CM0017生長條件: 25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法；定期移植法

Bacillus│sp.分離基物: 沉積物/深海沉積物提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 抗重金屬Pb；產酶微生物/蛋白酶、脂酶（三丁酸甘油酯）培養基: 472生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法

Cephalosporium│sp.分離基物: 冬蟲夏草提供形式: 斜面培養物；凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 14生長條件: 15℃存儲條件: 真空冷凍干燥法；定期移植法

Bacillus│thuringiensis分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 微生物殺蟲劑培養基: 2生長條件: 32℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法

Alcanivorax│venustensis分離基物: 沉積物/TVMC沉積物0-5cm提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 有機污染物降解菌/石油烴類降解菌培養基: 821生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法

Aciculosporium│take I. Miyake分離基物: 竹叢枝頂端葉鞘提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 14生長條件: 25存儲條件: 定期移植法

Eimeria│scabra分離基物: 豬的糞便提供形式: 其他安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 可供教學科研等使用。培養基: 0生長條件: 37存儲條件: 其他;

Saccharomyces│cerevisiae提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 用甜菜糖蜜制酒精培養基: CM0013生長條件: 25-28℃存儲條件: 真空冷凍干燥法
標準操作步驟：

產品僅用于科研如非指出，所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

1.液氮充分研磨樣品。

2.收集研磨成粉末的50mg樣品，置于1.5ml離心管中。

3.加入350μl65℃預熱的緩沖液IL，并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩，確保所有的組織團都分散均勻。

4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數次。

5.加入350μl氯仿，充分混勻，12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。

6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團或把組織碎片也一起轉移。

7.加入4μl RNase A，渦旋混勻。室溫放置2min。

8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無水乙醇，充分混勻。如：向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無水乙醇。

9.把上述混勻的液體轉移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結合DNA，棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請分兩次過柱。

10.將吸附柱重新套回收集管中，加入500μl緩沖液WB至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；

11.將吸附柱重新套回收集管中，加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；

注意：DNA Wash Buffer使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中，使用前須恢復到室溫。

12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g離心1min,棄去流出液；

13.將吸附柱重新套回2ml收集管中，*轉速（>13000×g）離心空結合柱1min以干燥柱子的基質；這一步對下面的洗脫步驟至關重要。

14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管，加入50-150μl65℃預熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min；

15. 室溫下，離心(>13000)1min，以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲于-20℃。