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上海聯祖生物科技有限公司
產品展廳
轉基因元件CaMV35終止子PCR試劑盒供應商
  • 品牌:聯祖
  • 產地:進口、國產
  • 貨號:LZR86029
  • 發布日期: 2020-11-26
  • 更新日期: 2025-01-10
產品詳請
產地 進口、國產
品牌 聯祖
貨號 LZR86029
用途 公司產品僅用于科研
包裝規格 50次
純度 %
CAS編號
是否進口

產品特點:

◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;

◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;

◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;

◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

參數規格:

產品名稱:轉基因元件CaMV35終止子PCR試劑盒供應商

貨號:LZR86029

產品規格:50次

產品運輸:低溫運輸

產品保存:-20℃保存

產品有效期:一年

產品特點:

產品僅用于科研本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。

 

需要注意:

PCR反應液請在冰中配制,然后置于PCR反應儀上進行PCR反應。這種冷啟動法(Cool Start Method)與熱啟動法(Hot Start Method)相結合,更能有效地減少PCR過程中的非特異性反應,增強PCR擴增的特異性,能得到良好的PCR結果。

PCR的反應條件:

因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。

◇ 循環次數

根據模板DNA的量以及擴增片段的大小,設定25~30個循環。

如果循環次數太少,擴增量不足;如果循環次數太多,則會出現Smear。

◇ Anneal以及Extension

合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時,每kbp大體可設定30秒~1分鐘;當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時會得不到擴增產物;Anneal溫度太低時,容易發生非特異性反應。另外,Extension時間太短時,會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優成;而Extension時間太長時,會出現Smear。

 

使用方法

一、樣品 DNA 的制備

1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒DNAout。

2.如果有 N 個樣品,則需要做 N+2 個提取,包括一個陽性對照和一個陰性對照。陽性對照是在 200μL 水中加 10μL PCR 陽性對照作為陽性對照,陰性對照是直接用 200μL 水作為陰性對照。提取結束后,*得到 200μL 模板 DNA(每個樣品)放冰上待用,溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL,否則PCR 抑制物很可能會抑制 PCR。二、PCR(60 μL 體系)

3.樣品管:在 N+2 個PCR 管中加入下列成分:成分 N 個樣品管 陰性對照 陽性對照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物對 各 2 μL 2 μL 2 μL 樣品 DNA 模板 各 18 μL - - 陽性對照(純化后) - 18 μL - 陰性對照(純化后) - - 18 μL電泳檢測

4.取 10-20 μL PCR 產物直接進行瓊脂糖凝膠電泳(本產品不需要單獨加loading buffer),使用 100 bp DNA Marker,如果樣品為陽性,將會得到長度為 3582 bp 的擴增產物。

二反應的準備:   

待各組份融化后先瞬時離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應體系,每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照,測試反應管可以有多個。配制過程中應注意無菌,戴口罩,并注意避免操作產生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風壓的設備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。   

三、PCR反應:   

降落PCR法(Touchdown PCR):94℃變性2分鐘;首循環:94℃變性30秒,68℃退火30秒,72℃延伸45秒;八個循環開始,每循環退火溫度下降1℃,其余不變;從第九個循環開始,反應條件固定為:94℃變性30秒,60℃退火30秒,72℃延伸45秒,循環32次;循環結束后,在72℃延伸7分鐘,*保持在4℃。

標準操作步驟:

產品僅用于科研如非指出,所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

1.液氮充分研磨樣品。

2.收集研磨成粉末的50mg樣品,置于1.5ml離心管中。

3.加入350μl65℃預熱的緩沖液IL,并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩,確保所有的組織團都分散均勻。

4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數次。

5.加入350μl氯仿,充分混勻,12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。

6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團或把組織碎片也一起轉移。

7.加入4μl RNase A,渦旋混勻。室溫放置2min。

8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無水乙醇,充分混勻。如:向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無水乙醇。

9.把上述混勻的液體轉移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結合DNA,棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請分兩次過柱。

10.將吸附柱重新套回收集管中,加入500μl緩沖液WB至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;

11.將吸附柱重新套回收集管中,加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;

注意:DNA Wash Buffer使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中,使用前須恢復到室溫。

12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,8,000×g離心1min,棄去流出液;

13.將吸附柱重新套回2ml收集管中,轉速(>13000×g)離心空結合柱1min以干燥柱子的基質;這一步對下面的洗脫步驟至關重要。

14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管,加入50-150μl65℃預熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min;

15. 室溫下,離心(>13000)1min,以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲于-20℃。
綠膿菌素測定用對照培養礎英文名稱:Pyocyanin determined by contrast medium base大鼠白介素21(IL-21)ELISA試劑盒 規格:13.9g/300ml保存:-20℃,避光

綠萍英文名稱:Azolla大鼠游離特異性抗原(fPSA)ELISA試劑盒規格:2g保存:-20℃,避光

綠絨蒿英文名稱:Meconopsis大鼠內皮細胞生長因子受體2(VEGFR-2/Flk-1)ELISA試劑盒規格:0.5g保存:-20℃,避光

綠原英文名稱:Peiminine人泛素激活酶(E1/UBAE)ELISA試劑盒 規格:20mg保存:-20℃,避光

英文名稱:Chloramphenicol大鼠單核細胞趨蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA試劑盒規格:200mg保存:-20℃,避光

波必利英文名稱:Pentoxifylline人紐蛋白(VCL)ELISA試劑盒規格:50mg保存:-20℃,避光

膽堿英文名稱:Choline chloride人血紅蛋白C(HbC)ELISA試劑盒 規格:50mg保存:-20℃,避光

平英文名稱:Clozapine人鐵蛋白(FE)ELISA試劑盒規格:100mg保存:-20℃,避光

碘羥英文名稱:Clioquinol人天門冬轉酶/谷草轉酶(GOT/GPT)ELISA試劑盒 規格:100mg保存:-20℃,避光

碘羥系統適用性試驗對照品英文名稱:Clofazimine人紅細胞生成素(EPO)ELISA試劑盒 規格:20mg保存:-20℃,避光

二物英文名稱:Glycols大鼠紅細胞生成素受體(EPOR)ELISA試劑盒規格:50mg保存:-20℃,避光

法齊明英文名稱:Azathioprine impurities人紅細胞生成素受體(EPOR)ELISA試劑盒規格:50mg保存:-20℃,避光

*英文名稱:Choline chloride succinate人抑素/穩定蛋白(ANG)ELISA試劑盒 規格:50mg保存:-20℃,避光

鉀英文名稱:Potassium chloride人病毒A(FLU A)ELISA試劑盒 規格:100mg保存:-20℃,避光

解磷定英文名稱:Pralidoxime chloride人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白抗體IgG(LF/LTF Ab-Ig)ELISA試劑盒規格:100mg保存:-20℃,避光

Cyclopropyl phenyl sulfide,99%犬葉(FA) 進口/國產

Chloromethyl phenyl sulfide,97%人葉(FA) 進口/國產

Benzyl phenyl sulfide,99%小鼠葉(FA) 進口/國產

Bis(4-methoxyphenyl) disulfide,97%大鼠葉(FA) 進口/國產

3,3′-Dihydroxydiphenyl disulfide,97%人血小板反應蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)進口/國產

Bis(4-chlorophenyl) disulfide,97%小鼠血小板反應蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)進口/國產

4-Aminophenyl disulfide,98%大鼠血小板反應蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)進口/國產

2-Aminophenyl disulfide,97%人游離脂肪(FFA) 進口/國產
轉基因元件CaMV35終止子PCR試劑盒供應商Sclerotinia│sclerotiorum提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 油菜菌核病病菌的多樣性分析培養基: 14生長條件: 20℃存儲條件: 真空冷凍干燥法;定期移植法

Saccharomonospora│viridis var fujianensis提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 篩選菌株培養基: CM0038生長條件: 37C存儲條件: 真空冷凍干燥

Aspergillus│awamori提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 釀造醬油。培養基: CM0077生長條件: 28-30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

枯草芽孢桿菌枯草亞種種屬: Bacillus│subtilis subsp. subtilis提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 抗生素測定菌;培養基: 0002生長條件: 30℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

Proteus│vulgaris分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 0002生長條件: 35℃存儲條件: -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法;礦物油法

Oceanibaculum│sp.分離基物: 水樣/表層海水提供形式: 凍干物模式菌株: no應用領域: 1.生物降解;2.生物催化;3.生物活性物質篩選; 4.海洋微生物生態學研究。培養基: 471生長條件: 25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法

Mesorhizobium│sp.提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 與沙打旺、斜莖黃芪共生固氮培養基: 0053生長條件: 28-30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法;礦物油法

Escherichia│coli分離基物: 污泥提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 基因工程常用菌培養基: 33生長條件: 37℃存儲條件: -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法

Botryosphaeria│ribis Grossenb. & Duggar分離基物: 枝干提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 14生長條件: 25存儲條件: -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法;定期移植法


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