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- 品牌：聯(lián)祖
- 產(chǎn)地：進口、國產(chǎn)
- 貨號：LZR86052
- 發(fā)布日期： 2020-11-26
- 更新日期： 2025-01-10
| 產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
| 品牌 | 聯(lián)祖 |
| 貨號 | LZR86052 |
| 用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50次 |
| 純度 | % |
| CAS編號 | |
| 是否進口 | 是 |
產(chǎn)品特點：
◇高特異性：與其他病毒無交叉反應，無非特異性擴增；
◇高靈敏度：檢測靈敏度可達10~100拷貝；
◇操作簡便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時進行多個檢測；
◇高通量：多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因元件NOS終止子PCR試劑盒規(guī)格
貨號：LZR86052
產(chǎn)品規(guī)格：50次
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點：
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
需要注意：
PCR反應液請在冰中配制，然后置于PCR反應儀上進行PCR反應。這種冷啟動法（Cool Start Method）與熱啟動法（Hot Start Method）相結(jié)合，更能有效地減少PCR過程中的非特異性反應，增強PCR擴增的特異性，能得到良好的PCR結(jié)果。
PCR的反應條件：
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小，設(shè)定25～30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設(shè)定30秒～1分鐘；當溫度設(shè)定在68℃以下時, 時間設(shè)定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現(xiàn)Smear。
使用方法
一、樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒DNAout。
2.如果有 N 個樣品，則需要做 N+2 個提取，包括一個陽性對照和一個陰性對照。陽性對照是在 200μL 水中加 10μL PCR 陽性對照作為陽性對照，陰性對照是直接用 200μL 水作為陰性對照。提取結(jié)束后，*得到 200μL 模板 DNA（每個樣品）放冰上待用，溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL，否則PCR 抑制物很可能會抑制 PCR。二、PCR（60 μL 體系）
3.樣品管：在 N+2 個PCR 管中加入下列成分：成分 N 個樣品管 陰性對照 陽性對照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物對 各 2 μL 2 μL 2 μL 樣品 DNA 模板 各 18 μL - - 陽性對照（純化后） - 18 μL - 陰性對照（純化后） - - 18 μL電泳檢測
4.取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物直接進行瓊脂糖凝膠電泳（本產(chǎn)品不需要單獨加loading buffer），使用 100 bp DNA Marker，如果樣品為陽性，將會得到長度為 3582 bp 的擴增產(chǎn)物。
二反應的準備：
待各組份融化后先瞬時離心，然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應體系，每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照，測試反應管可以有多個。配制過程中應注意無菌，戴口罩，并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染，推薦在有風壓的設(shè)備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。
三、PCR反應：
降落PCR法(Touchdown PCR)：94℃變性2分鐘;首循環(huán)：94℃變性30秒，68℃退火30秒，72℃延伸45秒;八個循環(huán)開始，每循環(huán)退火溫度下降1℃，其余不變;從第九個循環(huán)開始，反應條件固定為：94℃變性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸45秒，循環(huán)32次;循環(huán)結(jié)束后，在72℃延伸7分鐘，*保持在4℃。
標準操作步驟：
產(chǎn)品僅用于科研如非指出，所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。
1.液氮充分研磨樣品。
2.收集研磨成粉末的50mg樣品，置于1.5ml離心管中。
3.加入350μl65℃預熱的緩沖液IL，并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩，確保所有的組織團都分散均勻。
4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數(shù)次。
5.加入350μl氯仿，充分混勻，12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。
6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團或把組織碎片也一起轉(zhuǎn)移。
7.加入4μl RNase A，渦旋混勻。室溫放置2min。
8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無水乙醇，充分混勻。如：向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無水乙醇。
9.把上述混勻的液體轉(zhuǎn)移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結(jié)合DNA，棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請分兩次過柱。
10.將吸附柱重新套回收集管中，加入500μl緩沖液WB至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；
11.將吸附柱重新套回收集管中，加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；
注意：DNA Wash Buffer使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中，使用前須恢復到室溫。
12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g離心1min,棄去流出液；
13.將吸附柱重新套回2ml收集管中，轉(zhuǎn)速（>13000×g）離心空結(jié)合柱1min以干燥柱子的基質(zhì)；這一步對下面的洗脫步驟至關(guān)重要。
14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管，加入50-150μl65℃預熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min；
15. 室溫下，離心(>13000)1min，以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲于-20℃。
風藤英文名稱：Caulis Sinomenii人抗心肌抗體(AMA)ELISA試劑盒規(guī)格：0.5g保存：-20℃，避光
果英文名稱：Chinese olive大鼠可溶性CD86(B7-2/sCD86)ELISA試劑盒規(guī)格：1g保存：-20℃，避光
蒿英文名稱：Artemisia annua人Ⅰ型膠原N末端肽(NTX)ELISA試劑盒 規(guī)格：1.5g保存：-20℃，避光
蒿琥英文名稱：Artesunate人心鈉肽(ANP)ELISA試劑盒規(guī)格：100mg保存：-20℃，避光
蒿素英文名稱：Artemisinin人心肌營養(yǎng)素1(CT-1)ELISA試劑盒規(guī)格：100mg保存：-20℃，避光
蒿英文名稱：Artemisinic acid兔鉤端螺旋體IgG(Lep IgG)ELISA試劑盒規(guī)格：HPLC≥98% 20mg/支保存：-20℃，避光
蒿乙素；蒿素B英文名稱：Artemisinin, arteannuin B; B兔骨保護素(OPG)ELISA試劑盒 規(guī)格：HPLC≥98% 20mg/支保存：-20℃，避光
酶（10支/次購買量）英文名稱：Penicillinase (10 / times purchased)大鼠黑色素細胞抗體(MC Ab)ELISA試劑盒規(guī)格：2ml/支保存：-20℃，避光
霉胺英文名稱：Penicillamine大鼠干細胞因子/肥大細胞生長因子(SCF/MGF)ELISA試劑盒規(guī)格：100mg保存：-20℃，避光
霉胺二物英文名稱：Penicillamine two sulfide大鼠白三B4(LTB4)ELISA試劑盒規(guī)格：30mg/支保存：-20℃，避光
皮英文名稱：Peel雞C反應蛋白(CRP)ELISA試劑盒 規(guī)格：0.3g保存：-20℃，避光
藤堿英文名稱：Ferulic acid人多聚血清蛋白(PHSA)ELISA試劑盒 規(guī)格：20mg保存：-20℃，避光
系統(tǒng)適用性對照品英文名稱：Penicillin system suitability control products大鼠丙激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISA試劑盒規(guī)格：30mg保存：-20℃，避光
陽參苷元英文名稱：Qingyang ginseng glucoside yuan人遲現(xiàn)抗原4(VLA4)ELISA試劑盒 規(guī)格：20mg保存：-20℃，避光
可的松英文名稱：Hydrocortisone人生長素(ANG)ELISA試劑盒規(guī)格：50mg保存：-20℃，避光
4-Isopropylphenol,98%猴子巨噬細胞移動抑制因子(MIF) 進口/國產(chǎn)
2,3-Difluorophenol,98%大鼠巨噬細胞移動抑制因子(MIF) 進口/國產(chǎn)
3-Hydroxybenzotrifluoride,99%人環(huán)加氧酶2(COX-2) 進口/國產(chǎn)
4-Methylpyrocatechol,≥95%裸鼠環(huán)加氧酶2(COX-2) 進口/國產(chǎn)
3,4-Dimethoxyphenol,97%人6素F1a(6-keto-PGF1a) 進口/國產(chǎn)
2,4-Bis(α,α-dimethylbenzyl)phenol,95%小鼠6素F1a(6-keto-PGF1a) 進口/國產(chǎn)
2,5-Di-tert-Butylhydroquinone,99%大鼠6素F1a(6-keto-PGF1a) 進口/國產(chǎn)
(R)-(+)-1,1′-Bi(2-naphthol),99%兔6素F1a(6-keto-PGF1a) 進口/國產(chǎn)
轉(zhuǎn)基因元件NOS終止子PCR試劑盒規(guī)格Sinorhizobium│meliloti提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應用領(lǐng)域: 與紫花苜蓿共生固氮培養(yǎng)基: 0053生長條件: 28-30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法；礦物油法；定期移植法
Streptomyces│sp.分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領(lǐng)域: 抗耐藥細菌、培養(yǎng)基: CM0027生長條件: 28C存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥
Alternaria│alternata (Fr.) Keissl.分離基物: 黃櫨提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 25存儲條件: 定期移植法
牙齦卟啉單胞菌種屬: Porphyromonas gingivalis提供形式: 凍干粉安全等級: 2模式菌株: no培養(yǎng)基: 血瓊脂平板，哥倫比亞血平板生長條件: 37℃，厭氧，72-96h存儲條件: 2-8℃
Cytospora│chrysosperma (Pers.) Fr.分離基物: 楊樹干基部提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應用領(lǐng)域: 植物病原物；用于該菌種群演化與流行學監(jiān)測。培養(yǎng)基: 14生長條件: 25存儲條件: 定期移植法
Penicillium│sp.分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物；凍干物模式菌株: no應用領(lǐng)域: 有拮抗大腸埃希氏桿菌 Escherichia coli作用培養(yǎng)基: 14生長條件: 25-28℃存儲條件: 真空冷凍干燥法；定期移植法
Pseudomonas aeruginosa提供形式: 凍干粉安全等級: 2模式菌株: no應用領(lǐng)域: 藥敏對照培養(yǎng)基: 營養(yǎng)肉汁瓊脂：牛肉膏 3.0g，蛋白胨 10.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 1.0L，pH7.0。[注]：培養(yǎng)芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O，則有利于產(chǎn)生芽孢。pH7.0。121℃，15min。生長條件: 37℃，好氧
地衣芽孢桿菌種屬: Bacillus│licheniformis提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應用領(lǐng)域: 產(chǎn)耐熱α-淀粉酶。培養(yǎng)基: CM0002生長條件: 45℃存儲條件: 真空冷凍干燥法；定期移植法
Pestalotiopsis│sp.分離基物: 華山松皰銹病感病植株樹皮提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
