產地 | 進口、國產 |
品牌 | 聯祖 |
貨號 | LZR85974 |
用途 | 公司產品僅用于科研 |
包裝規格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
產品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
參數規格:
產品名稱:轉基因品系玉米NK603XMON810 PCR試劑盒說明書
貨號:LZR85974
產品規格:50次
產品運輸:低溫運輸
產品保存:-20℃保存
產品有效期:一年
產品特點:
產品僅用于科研本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
需要注意:
PCR反應液請在冰中配制,然后置于PCR反應儀上進行PCR反應。這種冷啟動法(Cool Start Method)與熱啟動法(Hot Start Method)相結合,更能有效地減少PCR過程中的非特異性反應,增強PCR擴增的特異性,能得到良好的PCR結果。
PCR的反應條件:
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環次數
根據模板DNA的量以及擴增片段的大小,設定25~30個循環。
如果循環次數太少,擴增量不足;如果循環次數太多,則會出現Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時,每kbp大體可設定30秒~1分鐘;當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時會得不到擴增產物;Anneal溫度太低時,容易發生非特異性反應。另外,Extension時間太短時,會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優成;而Extension時間太長時,會出現Smear。
使用方法
一、樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒DNAout。
2.如果有 N 個樣品,則需要做 N+2 個提取,包括一個陽性對照和一個陰性對照。陽性對照是在 200μL 水中加 10μL PCR 陽性對照作為陽性對照,陰性對照是直接用 200μL 水作為陰性對照。提取結束后,*得到 200μL 模板 DNA(每個樣品)放冰上待用,溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL,否則PCR 抑制物很可能會抑制 PCR。二、PCR(60 μL 體系)
3.樣品管:在 N+2 個PCR 管中加入下列成分:成分 N 個樣品管 陰性對照 陽性對照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物對 各 2 μL 2 μL 2 μL 樣品 DNA 模板 各 18 μL - - 陽性對照(純化后) - 18 μL - 陰性對照(純化后) - - 18 μL電泳檢測
4.取 10-20 μL PCR 產物直接進行瓊脂糖凝膠電泳(本產品不需要單獨加loading buffer),使用 100 bp DNA Marker,如果樣品為陽性,將會得到長度為 3582 bp 的擴增產物。
二反應的準備:
待各組份融化后先瞬時離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應體系,每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照,測試反應管可以有多個。配制過程中應注意無菌,戴口罩,并注意避免操作產生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風壓的設備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。
三、PCR反應:
降落PCR法(Touchdown PCR):94℃變性2分鐘;首循環:94℃變性30秒,68℃退火30秒,72℃延伸45秒;八個循環開始,每循環退火溫度下降1℃,其余不變;從第九個循環開始,反應條件固定為:94℃變性30秒,60℃退火30秒,72℃延伸45秒,循環32次;循環結束后,在72℃延伸7分鐘,*保持在4℃。
標準操作步驟:
產品僅用于科研如非指出,所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。
1.液氮充分研磨樣品。
2.收集研磨成粉末的50mg樣品,置于1.5ml離心管中。
3.加入350μl65℃預熱的緩沖液IL,并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩,確保所有的組織團都分散均勻。
4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數次。
5.加入350μl氯仿,充分混勻,12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。
6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團或把組織碎片也一起轉移。
7.加入4μl RNase A,渦旋混勻。室溫放置2min。
8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無水乙醇,充分混勻。如:向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無水乙醇。
9.把上述混勻的液體轉移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結合DNA,棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請分兩次過柱。
10.將吸附柱重新套回收集管中,加入500μl緩沖液WB至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;
11.將吸附柱重新套回收集管中,加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;
注意:DNA Wash Buffer使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中,使用前須恢復到室溫。
12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,8,000×g離心1min,棄去流出液;
13.將吸附柱重新套回2ml收集管中,轉速(>13000×g)離心空結合柱1min以干燥柱子的基質;這一步對下面的洗脫步驟至關重要。
14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管,加入50-150μl65℃預熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min;
15. 室溫下,離心(>13000)1min,以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲于-20℃。
莪術二;姜黃二,莪術英文名稱:Zedoary turmeric two ketone ketone; two, curzerenone兔子狀腺素(T4)ELISA試劑盒規格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光
莪術英文名稱:Curzerene兔子質金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒規格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光
莪術油英文名稱:Zedoary turmeric oil人促有絲分裂因子(MF/MPF)ELISA試劑盒 規格:0.2ml保存:-20℃,避光
鵝不食草英文名稱:Centipeda minima綿羊磷腺苷活蛋白激酶(AMPK)ELISA試劑盒規格:2g保存:-20℃,避光
鵝去氧膽英文名稱:Chenodeoxycholic acid小鼠8羥脫氧鳥苷(8-OHdG)ELISA試劑盒 規格:HPLC≥98% 20mg/支保存:-20℃,避光
厄貝沙坦英文名稱:Naftopidil人凝血酶(TM)ELISA試劑盒規格:100mg保存:-20℃,避光
厄多司坦英文名稱:Simvastatin人凝血酶原片段F1+2(F1+2)ELISA規格:100mg保存:-20℃,避光
餓螞蝗英文名稱:Manyflower tickclove herb人FMS樣酪激酶3(Flt3)ELISA試劑盒規格:1g保存:-20℃,避光
恩曲他濱英文名稱:Emtricitabine人抗白蛋白抗體(AAA)ELISA試劑盒 規格:100mg保存:-20℃,避光
恩替卡韋英文名稱:Entecavir人膽固(HDL-C)ELISA試劑盒規格:100mg保存:-20℃,避光
兒茶英文名稱:Catechu大鼠素B2(TXB2)ELISA試劑盒規格:0.5g保存:-20℃,避光
兒茶素英文名稱:Catechin人蛋白Z(Protein Z)ELISA試劑盒規格:20mg保存:-20℃,避光
二-(2-)英文名稱:Two phenyl (2 chloro phenyl) methanol人游離原卟啉(FEP)ELISA試劑盒 規格:50mg保存:-20℃,避光
二A英文名稱:Two phenyl heptane A人白介素17(IL-17)ELISA試劑盒規格:20mg保存:-20℃,避光
二丙倍他米松英文名稱:Ifosfamide人凝血因子Ⅹ(FⅩ)ELISA試劑盒規格:100mg保存:-20℃,避光
Diphenylcarbinol,99%小鼠生成素受體Tie1(ANG-R-Tie1) 進口/國產
4-(4-Nitrophenylazo)-1-naphthol大鼠生成素受體Tie1(ANG-R-Tie1) 進口/國產
Anthrone (ACS,97%)人生成素受體Tie2(ANG-R-Tie2) 進口/國產
Tetrabutylammonium hydrogensulfate,97%小鼠生成素受體Tie2(ANG-R-Tie2) 進口/國產
1-Pentadecanol,99%豬生成素受體Tie2(ANG-R-Tie2) 進口/國產
Farnesol,95%大鼠生成素受體Tie2(ANG-R-Tie2) 進口/國產
Michler's ketone,98%人TH糖蛋白(THP) 進口/國產
Heptacosane,≥98.0%人質金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2) 進口/國產
轉基因品系玉米NK603XMON810 PCR試劑盒說明書嗜熱鏈球菌種屬: Streptococcus thermophilus提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 牛奶中青霉素的檢測;用于益生菌類保健食品 。培養基: MRS培養基:酪胨 10.0g,牛肉粉 8.0g,酵母粉 4.0 g,葡萄糖 20.0 g,硫酸鎂 0.2 g,乙酸鈉 5.0 g,檸檬酸三銨 2.0 g,磷酸氫二鉀 2.0 g,硫酸錳 0.05 g,吐溫80 1.0 g,蒸餾水 1000mL。pH6.2±0.2。121℃,15min。生長條件: 37℃,厭氧存儲條件: 真空冷凍干燥法
Colletotrichum│sp.分離基物: 植物提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 0014生長條件: 25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
Sphingomonas│faeni分離基物: 土壤提供形式: 凍干物模式菌株: no培養基: 848生長條件: 4℃存儲條件: 真空冷凍干燥法
Saccharomyces│cerevisiae提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 酒精。培養基: CM0077生長條件: 28℃存儲條件: 真空冷凍干燥法
Bacillus│hwajinpoensis分離基物: 泥樣提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 分解卵磷脂培養基: 0223生長條件: 30℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
Pichiasp.分離基物: 昆蟲提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: yes培養基: CM0181;酵母菌培養基(YeastCultureMedium);酵母膏3.0g,麥芽浸膏3.0g,蛋白胨5.0g,葡萄糖10.0g,瓊脂20.0g,蒸餾水1.0L。生長條件: 25℃;好氧存儲條件: -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
Stropharia│rugosoannulata Farl. ex Murrill提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 14生長條件: 25存儲條件: 定期移植法
鏈霉菌種屬: Streptomyces│sp.分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 0012生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
Agrocybe│aegerita提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 食用(浙江栽培品種)培養基: 0017生長條件: 25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;礦物油法