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上海聯祖生物科技有限公司
產品展廳
轉基因品系油菜RF1探針法qPCR試劑盒說明書
  • 品牌:聯祖
  • 產地:進口、國產
  • 貨號:LZR85798
  • 發布日期: 2020-11-25
  • 更新日期: 2025-01-10
產品詳請
產地 進口、國產
品牌 聯祖
貨號 LZR85798
用途 公司產品僅用于科研
包裝規格 50次
純度 %
CAS編號
是否進口

參數規格:

產品名稱:轉基因品系油菜RF1探針法qPCR試劑盒說明書

貨號:LZR85798

產品規格:50次

產品運輸:低溫運輸

產品保存:-20℃保存

產品有效期:一年

產品特點:

產品僅用于科研本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。

產品特點:

◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;

◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;

◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;

◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

 

需要注意:

PCR反應液請在冰中配制,然后置于PCR反應儀上進行PCR反應。這種冷啟動法(Cool Start Method)與熱啟動法(Hot Start Method)相結合,更能有效地減少PCR過程中的非特異性反應,增強PCR擴增的特異性,能得到良好的PCR結果。

PCR的反應條件:

因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。

◇ 循環次數

根據模板DNA的量以及擴增片段的大小,設定25~30個循環。

如果循環次數太少,擴增量不足;如果循環次數太多,則會出現Smear。

◇ Anneal以及Extension

合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時,每kbp大體可設定30秒~1分鐘;當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時會得不到擴增產物;Anneal溫度太低時,容易發生非特異性反應。另外,Extension時間太短時,會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優成;而Extension時間太長時,會出現Smear。

 

使用方法

一、樣品 DNA 的制備

1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒DNAout。

2.如果有 N 個樣品,則需要做 N+2 個提取,包括一個陽性對照和一個陰性對照。陽性對照是在 200μL 水中加 10μL PCR 陽性對照作為陽性對照,陰性對照是直接用 200μL 水作為陰性對照。提取結束后,*得到 200μL 模板 DNA(每個樣品)放冰上待用,溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL,否則PCR 抑制物很可能會抑制 PCR。二、PCR(60 μL 體系)

3.樣品管:在 N+2 個PCR 管中加入下列成分:成分 N 個樣品管 陰性對照 陽性對照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物對 各 2 μL 2 μL 2 μL 樣品 DNA 模板 各 18 μL - - 陽性對照(純化后) - 18 μL - 陰性對照(純化后) - - 18 μL電泳檢測

4.取 10-20 μL PCR 產物直接進行瓊脂糖凝膠電泳(本產品不需要單獨加loading buffer),使用 100 bp DNA Marker,如果樣品為陽性,將會得到長度為 3582 bp 的擴增產物。

二反應的準備:   

待各組份融化后先瞬時離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應體系,每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照,測試反應管可以有多個。配制過程中應注意無菌,戴口罩,并注意避免操作產生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風壓的設備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。   

三、PCR反應:   

降落PCR法(Touchdown PCR):94℃變性2分鐘;首循環:94℃變性30秒,68℃退火30秒,72℃延伸45秒;從八個循環開始,每循環退火溫度下降1℃,其余不變;從第九個循環開始,反應條件固定為:94℃變性30秒,60℃退火30秒,72℃延伸45秒,循環32次;循環結束后,在72℃延伸7分鐘,*保持在4℃。

人環磷酸鳥苷Elisa Kit*錢HP1β (D2F2) XP® Rabbit mAb20 ul

人肌紅蛋白Elisa Kit圖片HP1β (D2F2) XP® Rabbit mAb100 ul

人肌球蛋白輕鏈激酶Elisa Kit說明書E-Cadherin (4A2) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)500 ul

人生長因子ⅡElisa Kit圖片CD3 (UCHT1) Mouse mAb (FITC Conjugate)100 ul

小鼠白介素17AElisa Kit圖片Phospho-c-Fos (Ser32) (D82C12) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)100 ul

RNA 級 SDS( 十二烷基硫酸鈉 )100g說明書CD133 (D4W4N) XP® Rabbit mAb20 ul

Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)elisa分析檢測試劑盒CD133 (D4W4N) XP® Rabbit mAb100 ul

小鼠甲狀旁腺激素相關蛋白(PTHrP)elisa分析檢測試劑盒ALPP (3E5C7) Mouse mAb1 Kit

小鼠25羥基膽固醇(25-OHC)elisa分析檢測試劑盒Tight Junction Antibody Sampler Kit100 ug

豚鼠白介素10(IL-10)elisa分析檢測試劑盒Lamin A (133A2) Mouse mAb100 ul

人膽固醇7α-羥化酶(CYP7A)elisa分析檢測試劑盒CtBP1 (D2D6) Rabbit mAb100 ul

EB病毒(Ebv)抗體(IgM)elisa分析檢測試劑盒Smad2/3 (D7G7) XP® Rabbit mAb20 ul

犬白介素11(IL-11)elisa分析檢測試劑盒Smad2/3 (D7G7) XP® Rabbit mAb100 ul

貓白介素6(IL-6)elisa分析檢測試劑盒DYKDDDDK Tag (D6W5B) Rabbit mAb (Binds to same epitope as Sigma's Anti-FLAG® M2 Antibody) (HRP Conjugate)1 Kit

大鼠基質金屬蛋白酶13(MMP-13)elisa分析檢測試劑盒Lysine Acetyltransferase Antibody Sampler Kit100 ul

大鼠胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)elisa分析檢測試劑盒Bok (D7V2N) Rabbit mAb100 ul

倉鼠脂聯素 C1Q和膠原域(ADIPOQ)elisa分析檢測試劑盒UBA2 (D15C11) Rabbit mAb300 ul
轉基因品系油菜RF1探針法qPCR試劑盒說明書蘇云金芽孢桿菌種屬: Bacillus│thuringiensis提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 0002生長條件: 28-32℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

Aspergillus│flavus Link分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 14生長條件: 25存儲條件: 定期移植法

Microbacterium│lindanitolerans分離基物: 發酵床墊料提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 2生長條件: 30℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

白地霉種屬: GeotrichumcandidumLink安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 飼料酵母培養基: 13生長條件: 25-28℃

Corynebacterium│crenatum提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: L-白氨酸培養基: 0032生長條件: 30℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

Pleurotus│ostreatus (Jacq.) P. Kumm.提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 14生長條件: 25存儲條件: 定期移植法

Eimeria│tenella分離基物: 雞糞便提供形式: 其他安全等級: 2模式菌株: no應用領域: 用于科研培養基: 0生長條件: 37存儲條件: 其他;

Bacillus│cereus提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no培養基: 0002生長條件: 30℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

Marinobacter│koreensis分離基物: 沉積物提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 海洋菌種資源培養基: 0223生長條件: 30℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
標準操作步驟:

產品僅用于科研如非指出,所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

1.液氮充分研磨樣品。

2.收集研磨成粉末的50mg樣品,置于1.5ml離心管中。

3.加入350μl65℃預熱的緩沖液IL,并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩,確保所有的組織團都分散均勻。

4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數次。

5.加入350μl氯仿,充分混勻,12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。

6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團或把組織碎片也一起轉移。

7.加入4μl RNase A,渦旋混勻。室溫放置2min。

8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無水乙醇,充分混勻。如:向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無水乙醇。

9.把上述混勻的液體轉移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結合DNA,棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請分兩次過柱。

10.將吸附柱重新套回收集管中,加入500μl緩沖液WB至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;

11.將吸附柱重新套回收集管中,加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;

注意:DNA Wash Buffer使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中,使用前須恢復到室溫。

12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,8,000×g離心1min,棄去流出液;

13.將吸附柱重新套回2ml收集管中,*轉速(>13000×g)離心空結合柱1min以干燥柱子的基質;這一步對下面的洗脫步驟至關重要。

14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管,加入50-150μl65℃預熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min;

15. 室溫下,離心(>13000)1min,以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲于-20℃。


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