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上海聯(lián)祖生物科技有限公司
產品展廳
轉基因品系棉花COT102染料法qPCR試劑盒供應商
  • 品牌:聯(lián)祖
  • 產地:進口、國產
  • 貨號:LZR85597
  • 發(fā)布日期: 2020-11-24
  • 更新日期: 2025-01-10
產品詳請
產地 進口、國產
品牌 聯(lián)祖
貨號 LZR85597
用途 公司產品僅用于科研
包裝規(guī)格 50次
純度 %
CAS編號
是否進口

產品特點:

◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;

◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;

◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;

◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

參數(shù)規(guī)格:

產品名稱:轉基因品系棉花COT102染料法qPCR試劑盒供應商

貨號:LZR85597

產品規(guī)格:50次

產品運輸:低溫運輸

產品保存:-20℃保存

產品有效期:一年

產品特點:

產品僅用于科研本產品就是根據保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。

 

需要注意:

PCR反應液請在冰中配制,然后置于PCR反應儀上進行PCR反應。這種冷啟動法(Cool Start Method)與熱啟動法(Hot Start Method)相結合,更能有效地減少PCR過程中的非特異性反應,增強PCR擴增的特異性,能得到良好的PCR結果。

PCR的反應條件:

因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。

◇ 循環(huán)次數(shù)

根據模板DNA的量以及擴增片段的大小,設定25~30個循環(huán)。

如果循環(huán)次數(shù)太少,擴增量不足;如果循環(huán)次數(shù)太多,則會出現(xiàn)Smear。

◇ Anneal以及Extension

合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時,每kbp大體可設定30秒~1分鐘;當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時會得不到擴增產物;Anneal溫度太低時,容易發(fā)生非特異性反應。另外,Extension時間太短時,會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優(yōu)成;而Extension時間太長時,會出現(xiàn)Smear。

 

使用方法

一、樣品 DNA 的制備

1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒DNAout。

2.如果有 N 個樣品,則需要做 N+2 個提取,包括一個陽性對照和一個陰性對照。陽性對照是在 200μL 水中加 10μL PCR 陽性對照作為陽性對照,陰性對照是直接用 200μL 水作為陰性對照。提取結束后,*得到 200μL 模板 DNA(每個樣品)放冰上待用,溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL,否則PCR 抑制物很可能會抑制 PCR。二、PCR(60 μL 體系)

3.樣品管:在 N+2 個PCR 管中加入下列成分:成分 N 個樣品管 陰性對照 陽性對照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物對 各 2 μL 2 μL 2 μL 樣品 DNA 模板 各 18 μL - - 陽性對照(純化后) - 18 μL - 陰性對照(純化后) - - 18 μL電泳檢測

4.取 10-20 μL PCR 產物直接進行瓊脂糖凝膠電泳(本產品不需要單獨加loading buffer),使用 100 bp DNA Marker,如果樣品為陽性,將會得到長度為 3582 bp 的擴增產物。

二反應的準備:   

待各組份融化后先瞬時離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應體系,每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照,測試反應管可以有多個。配制過程中應注意無菌,戴口罩,并注意避免操作產生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風壓的設備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。   

三、PCR反應:   

降落PCR法(Touchdown PCR):94℃變性2分鐘;首循環(huán):94℃變性30秒,68℃退火30秒,72℃延伸45秒;八個循環(huán)開始,每循環(huán)退火溫度下降1℃,其余不變;從第九個循環(huán)開始,反應條件固定為:94℃變性30秒,60℃退火30秒,72℃延伸45秒,循環(huán)32次;循環(huán)結束后,在72℃延伸7分鐘,*保持在4℃。

標準操作步驟:

產品僅用于科研如非指出,所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

1.液氮充分研磨樣品。

2.收集研磨成粉末的50mg樣品,置于1.5ml離心管中。

3.加入350μl65℃預熱的緩沖液IL,并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩,確保所有的組織團都分散均勻。

4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數(shù)次。

5.加入350μl氯仿,充分混勻,12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。

6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團或把組織碎片也一起轉移。

7.加入4μl RNase A,渦旋混勻。室溫放置2min。

8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無水乙醇,充分混勻。如:向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無水乙醇。

9.把上述混勻的液體轉移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結合DNA,棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請分兩次過柱。

10.將吸附柱重新套回收集管中,加入500μl緩沖液WB至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;

11.將吸附柱重新套回收集管中,加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;

注意:DNA Wash Buffer使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中,使用前須恢復到室溫。

12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,8,000×g離心1min,棄去流出液;

13.將吸附柱重新套回2ml收集管中,轉速(>13000×g)離心空結合柱1min以干燥柱子的基質;這一步對下面的洗脫步驟至關重要。

14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管,加入50-150μl65℃預熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min;

15. 室溫下,離心(>13000)1min,以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲于-20℃。
小鼠β細胞素(BTC)elisa分析檢測試劑盒THEM2 Antibody100 ul

小鼠D-甘油醛3-磷酸elisa分析檢測試劑盒WASP (D9C8) Rabbit mAb100 ul

小鼠Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)elisa分析檢測試劑盒Cytochrome c Antibody20 ul

兔鉤端螺旋體IgG(Lep IgG)elisa分析檢測試劑盒Cytochrome c Antibody100 ul

豚鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)elisa分析檢測試劑盒CDK4 (D9G3E) Rabbit mAb (PE Conjugate)100 ul

人高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)elisa分析檢測試劑盒ATP2A1/SERCA1 (A988) Antibody100 ul

人干擾素調節(jié)因子8(IRF8)elisa分析檢測試劑盒Granzyme B Antibody100 ul

人八聚體轉錄因子(OTF2A)elisa分析檢測試劑盒HIF-1α (D1S7W) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)100 ul

γ干擾素誘導單核細胞因子(MIG/CXCL9)elisa分析檢測試劑盒Phospho-Rb (Ser807/811) (D20B12) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)100 ul

Rho家族GTP酶1(RND1)elisa分析檢測試劑盒Pan-Keratin (C11) Mouse mAb (Biotinylated)500μl

Rho關聯(lián)含卷曲螺旋蛋白激酶2(Rock-2)elisa分析檢測試劑盒NCAM1 (CD56) (MY31) Mouse mAb (PE-Cy7® Conjugate)100 ul

DNA損傷誘導轉錄因子4樣蛋白(DDIT4/RTP801)elisa分析檢測試劑盒Cytochrome c (136F3) Rabbit mAb20 ul

C多肽(CP)elisa分析檢測試劑盒Cytochrome c (136F3) Rabbit mAb100 ul

Alpha-D 生育酚/維生素E(Alpha-D TPL)elisa分析檢測試劑盒Phospho-Myt1 (Ser83) Antibody20 ul

綿羊基質金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP9/Gelatinase B)elisa分析檢測試劑盒Phospho-Myt1 (Ser83) Antibody100 ul

HSP90抗體(IgG)elisa分析檢測試劑盒Myt1 Antibody20 ul

HSP60抗體(IgG)elisa分析檢測試劑盒Myt1 Antibody100 ul
轉基因品系棉花COT102染料法qPCR試劑盒供應商Thanatephorus│cucumeris (A.B. Frank) Donk分離基物: 油松葉提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 25存儲條件: 定期移植法

Mycobacterium│tuberculosis提供形式: 凍干物安全等級: 3模式菌株: no應用領域: 研究生長條件: 37℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

Campylobacter│jejuni分離基物: 雞空腸提供形式: 凍結物安全等級: 2模式菌株: no應用領域: 科研教學培養(yǎng)基: 0生長條件: 42存儲條件: 真空冷凍干燥法;

Weissella│sp.分離基物: 二氧化碳氣體提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 啤酒有害菌培養(yǎng)基: 6生長條件: 30℃存儲條件: -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法

Monascus│sp.分離基物: 紅曲米提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 可用于釀造 紅曲菌(Monascus spp.)是我國重要的微生物資源,在我國已有上千年的使用歷史,被廣泛用于食品發(fā)酵劑、食品著色劑和中藥配伍的 。由于紅曲菌在發(fā)酵過程中能產生多種具有生理活性的代謝產物:如紅曲色素、Monacolin類物質、γ-氨基丁酸以及多種酶類培養(yǎng)基: 14生長條件: 28℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

Mucor│foenicola提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25-28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

Micromonospora│sp.分離基物: 水庫底泥土提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: CM0012生長條件: 35-37C存儲條件: 真空冷凍干燥

Rhizobium│sp.分離基物: 根瘤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 63生長條件: 28存儲條件: 定期移植法

Fusarium│sp.分離基物: 根提供形式: 凍結物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 抗金黃色葡萄球菌和大腸桿菌培養(yǎng)基: CM0014生長條件: 25C存儲條件: -80℃冰箱凍結;礦物油法


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