|
- 品牌：聯(lián)祖
- 產(chǎn)地：進(jìn)口、國產(chǎn)
- 貨號：LZR85460
- 發(fā)布日期： 2020-11-23
- 更新日期： 2025-01-10
| 產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
| 品牌 | 聯(lián)祖 |
| 貨號 | LZR85460 |
| 用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50次 |
| 純度 | % |
| CAS編號 | |
| 是否進(jìn)口 | 是 |
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因品系大豆GU262 PCR試劑盒規(guī)格
貨號：LZR85460
產(chǎn)品規(guī)格：50次
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
◇高特異性：與其他病毒無交叉反應(yīng)，無非特異性擴(kuò)增；
◇高靈敏度：檢測靈敏度可達(dá)10~100拷貝；
◇操作簡便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測；
◇高通量：多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
需要注意：
PCR反應(yīng)液請?jiān)诒信渲疲缓笾糜赑CR反應(yīng)儀上進(jìn)行PCR反應(yīng)。這種冷啟動(dòng)法（Cool Start Method）與熱啟動(dòng)法（Hot Start Method）相結(jié)合，更能有效地減少PCR過程中的非特異性反應(yīng)，增強(qiáng)PCR擴(kuò)增的特異性，能得到良好的PCR結(jié)果。
PCR的反應(yīng)條件：
因擴(kuò)增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴(kuò)增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴(kuò)增片段的大小，設(shè)定25～30個(gè)循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會(huì)出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預(yù)備實(shí)驗(yàn)可2℃間隔進(jìn)行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進(jìn)行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時(shí)，每kbp大體可設(shè)定30秒～1分鐘；當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時(shí), 時(shí)間設(shè)定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時(shí)會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時(shí)，容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外，Extension時(shí)間太短時(shí)，會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物或者會(huì)有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時(shí)間太長時(shí)，會(huì)出現(xiàn)Smear。
使用方法
一、樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒DNAout。
2.如果有 N 個(gè)樣品，則需要做 N+2 個(gè)提取，包括一個(gè)陽性對照和一個(gè)陰性對照。陽性對照是在 200μL 水中加 10μL PCR 陽性對照作為陽性對照，陰性對照是直接用 200μL 水作為陰性對照。提取結(jié)束后，*得到 200μL 模板 DNA（每個(gè)樣品）放冰上待用，溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL，否則PCR 抑制物很可能會(huì)抑制 PCR。二、PCR（60 μL 體系）
3.樣品管：在 N+2 個(gè)PCR 管中加入下列成分：成分 N 個(gè)樣品管 陰性對照 陽性對照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物對 各 2 μL 2 μL 2 μL 樣品 DNA 模板 各 18 μL - - 陽性對照（純化后） - 18 μL - 陰性對照（純化后） - - 18 μL電泳檢測
4.取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物直接進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳（本產(chǎn)品不需要單獨(dú)加loading buffer），使用 100 bp DNA Marker，如果樣品為陽性，將會(huì)得到長度為 3582 bp 的擴(kuò)增產(chǎn)物。
二反應(yīng)的準(zhǔn)備：
待各組份融化后先瞬時(shí)離心，然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應(yīng)體系，每次實(shí)驗(yàn)需加一個(gè)陰性和一個(gè)陽性對照，測試反應(yīng)管可以有多個(gè)。配制過程中應(yīng)注意無菌，戴口罩，并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染，推薦在有風(fēng)壓的設(shè)備如超凈臺或生物安全柜中進(jìn)行操作。建議配制完畢后瞬時(shí)離心以使液體沉至管底。
三、PCR反應(yīng)：
降落PCR法(Touchdown PCR)：94℃變性2分鐘;首循環(huán)：94℃變性30秒，68℃退火30秒，72℃延伸45秒;從八個(gè)循環(huán)開始，每循環(huán)退火溫度下降1℃，其余不變;從第九個(gè)循環(huán)開始，反應(yīng)條件固定為：94℃變性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸45秒，循環(huán)32次;循環(huán)結(jié)束后，在72℃延伸7分鐘，*保持在4℃。
人CC趨化因子5（CCL5/D17S136E/SCYA5）elisa分析檢測試劑盒Clathrin Heavy Chain (P1663) Antibody100 ul
人B細(xì)胞活化因子（BAFF）elisa分析檢測試劑盒EEA1 Antibody100 ul
人5-羥色胺受體6（HTR6）elisa分析檢測試劑盒Phospho-IRF-7 (Ser437/438) (D6M2I) Rabbit mAb (Mouse Specific)100 ul
人5羥色胺/血清素/血清胺（5HT/ST）抗體（IgA）elisa分析檢測試劑盒PA28γ Antibody100 ul
人5羥色胺/血清素/血清胺（5HT/ST）抗體（IgG）elisa分析檢測試劑盒Rab11a Antibody100 ul
人3-硝基酪氨酸（3-NT）elisa分析檢測試劑盒Rab11b Antibody100 ul
人Ⅰ型前膠原C末端肽（CⅠCP）elisa分析檢測試劑盒Ribosomal Protein L7a (E109) Antibody100 ul
犬α-3干擾素（IFN-α3）elisa分析檢測試劑盒Phospho-β-Arrestin 1 (Ser412) (6-24) Mouse mAb100 ul
牛纖維蛋白原（Fb）elisa分析檢測試劑盒Phospho-PDGF Receptor α (Tyr762) (D9B1N) Rabbit mAb100 ul
牛維生素C（VC）elisa分析檢測試劑盒Lamin B2 (E1S1Q) Rabbit mAb (HRP Conjugate)100 ul
貓生長激素（GH）elisa分析檢測試劑盒Notch2 (8A1) Rabbit mAb100 ul
貓三碘甲狀腺原氨酸（T3）elisa分析檢測試劑盒Notch4 (L5C5) Mouse mAb100 ul
雞膽囊收縮素A受體（CCKAR）elisa分析檢測試劑盒eIF4A (F52) Antibody100 ug
雞雌二醇（E2）elisa分析檢測試劑盒CD3 (17A2) Rat mAb (APC Conjugate)100 ul
雞β內(nèi)酰胺酶（β-lactamase）elisa分析檢測試劑盒PHB1 Antibody20 ul
大鼠可溶性Toll樣受體6（sTLR6）elisa分析檢測試劑盒PHB1 Antibody100 ul
大鼠抗血小板抗體（IgG）elisa分析檢測試劑盒EML4 Antibody100 ul
轉(zhuǎn)基因品系大豆GU262 PCR試劑盒規(guī)格熒光假單胞菌種屬: Pseudomonasfluorescens分離基物: 自來水安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 2生長條件: 30℃
Lactobacillus│casei分離基物: 牛奶提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 用于發(fā)酵豆制品的研究培養(yǎng)基: CM0002生長條件: 30℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法
Aspergillus│flavus提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no培養(yǎng)基: 0015生長條件: 25-28℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Escherichia│coli分離基物: 中段尿提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no培養(yǎng)基: CM0051生長條件: 36℃存儲(chǔ)條件: -80℃冰箱凍結(jié)法
Bacillus│flexus分離基物: 土樣提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 2生長條件: 37℃存儲(chǔ)條件: -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法;其他
Beauveria│bassiana提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0436生長條件: 28℃
Aspergillus│sp.分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 生理活性物質(zhì)，乙酰膽堿酯酶抑制劑培養(yǎng)基: CM0018生長條件: 26C存儲(chǔ)條件: -80℃冰箱凍結(jié)；礦物油法；定期移植法
Escherichia│coli提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 33生長條件: 37℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法
Enterococcus│durans提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0006生長條件: 37℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
標(biāo)準(zhǔn)操作步驟：
產(chǎn)品僅用于科研如非指出，所有離心步驟均為使用臺式離心機(jī)在室溫下離心。
1.液氮充分研磨樣品。
2.收集研磨成粉末的50mg樣品，置于1.5ml離心管中。
3.加入350μl65℃預(yù)熱的緩沖液IL，并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩，確保所有的組織團(tuán)都分散均勻。
4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數(shù)次。
5.加入350μl氯仿，充分混勻，12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。
6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團(tuán)或把組織碎片也一起轉(zhuǎn)移。
7.加入4μl RNase A，渦旋混勻。室溫放置2min。
8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無水乙醇，充分混勻。如：向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無水乙醇。
9.把上述混勻的液體轉(zhuǎn)移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結(jié)合DNA，棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請分兩次過柱。
10.將吸附柱重新套回收集管中，加入500μl緩沖液WB至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；
11.將吸附柱重新套回收集管中，加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；
注意：DNA Wash Buffer使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中，使用前須恢復(fù)到室溫。
12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g離心1min,棄去流出液；
13.將吸附柱重新套回2ml收集管中，*轉(zhuǎn)速（>13000×g）離心空結(jié)合柱1min以干燥柱子的基質(zhì)；這一步對下面的洗脫步驟至關(guān)重要。
14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管，加入50-150μl65℃預(yù)熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min；
15. 室溫下，離心(>13000)1min，以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲(chǔ)于-20℃。
