|
| 產地 | 進口、國產 |
| 品牌 | 聯祖 |
| 貨號 | LZR85454 |
| 用途 | 公司產品僅用于科研 |
| 包裝規格 | 50次 |
| 純度 | % |
| CAS編號 | |
| 是否進口 | 是 |
參數規格：
產品名稱：轉基因品系大豆G94-1探針法qPCR試劑盒說明書
貨號：LZR85454
產品規格：50次
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
產品特點：
產品僅用于科研本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
產品特點：
◇高特異性：與其他病毒無交叉反應，無非特異性擴增；
◇高靈敏度：檢測靈敏度可達10~100拷貝；
◇操作簡便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時進行多個檢測；
◇高通量：多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
需要注意：
PCR反應液請在冰中配制，然后置于PCR反應儀上進行PCR反應。這種冷啟動法（Cool Start Method）與熱啟動法（Hot Start Method）相結合，更能有效地減少PCR過程中的非特異性反應，增強PCR擴增的特異性，能得到良好的PCR結果。
PCR的反應條件：
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環次數
根據模板DNA的量以及擴增片段的大小，設定25～30個循環。
如果循環次數太少，擴增量不足；如果循環次數太多，則會出現Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設定30秒～1分鐘；當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產物；Anneal溫度太低時，容易發生非特異性反應。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優成；而Extension時間太長時，會出現Smear。
使用方法
一、樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒DNAout。
2.如果有 N 個樣品，則需要做 N+2 個提取，包括一個陽性對照和一個陰性對照。陽性對照是在 200μL 水中加 10μL PCR 陽性對照作為陽性對照，陰性對照是直接用 200μL 水作為陰性對照。提取結束后，*得到 200μL 模板 DNA（每個樣品）放冰上待用，溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL，否則PCR 抑制物很可能會抑制 PCR。二、PCR（60 μL 體系）
3.樣品管：在 N+2 個PCR 管中加入下列成分：成分 N 個樣品管 陰性對照 陽性對照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物對 各 2 μL 2 μL 2 μL 樣品 DNA 模板 各 18 μL - - 陽性對照（純化后） - 18 μL - 陰性對照（純化后） - - 18 μL電泳檢測
4.取 10-20 μL PCR 產物直接進行瓊脂糖凝膠電泳（本產品不需要單獨加loading buffer），使用 100 bp DNA Marker，如果樣品為陽性，將會得到長度為 3582 bp 的擴增產物。
二反應的準備：
待各組份融化后先瞬時離心，然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應體系，每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照，測試反應管可以有多個。配制過程中應注意無菌，戴口罩，并注意避免操作產生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染，推薦在有風壓的設備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。
三、PCR反應：
降落PCR法(Touchdown PCR)：94℃變性2分鐘;首循環：94℃變性30秒，68℃退火30秒，72℃延伸45秒;從八個循環開始，每循環退火溫度下降1℃，其余不變;從第九個循環開始，反應條件固定為：94℃變性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸45秒，循環32次;循環結束后，在72℃延伸7分鐘，*保持在4℃。
AE-1（小鼠雜交瘤細胞（抗AChE））說明書C/EBPδ Antibody100 ul
人肺大內皮細胞完全培養基現貨供應NCK1 (15B9) Rabbit mAb100 ul
人直平滑肌細胞完全培養基現貨供應AP-2γ Antibody100 ul
人肝竇內皮細胞完全培養基說明書SQSTM1/p62 (D6M5X) Rabbit mAb (Rodent Specific)100μl
人視網膜色素上皮細胞完全培養基說明書VISTA (D5L5T) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate)100 ul
大鼠尿道上皮細胞完全培養基報價Phospho-MAPK/CDK Substrates (PXS*P or S*PXR/K) (34B2) Rabbit mAb100 ul
大鼠腦成纖維細胞完全培養基現貨供應Rap1B (36E1) Rabbit mAb100 ul
大鼠神經小膠質細胞完全培養基說明書AE1/SLC4A1 (D3X1R) Rabbit mAb100 ul
小鼠肺大內皮細胞完全培養基現貨供應Phospho-SirT1 (Ser27) Antibody100 ul
小鼠肝星形細胞完全培養基報價PAR-4 Antibody100 ul
小鼠腎上皮細胞完全培養基價格Merlin/Ezrin/Radixin/Moesin (D1P8I) Rabbit mAb100 ul
氯化纈草素51771-49-4實驗步驟Phospho-PAR-4 (Thr163) Antibody1 Kit
刺桐堿487-58-1特價供應Raf Family Antibody Sampler Kit100 ul
D-無水葡萄糖50-99-7價格Phospho-eEF2 (Thr56) Antibody100 ul
刺五加苷D79484-75-6實驗方法FGF Receptor 2 (D4L2V) Rabbit mAb100 ul
東莨菪內酯92-61-5 實驗步驟eEF2 Antibody100 ul
二氫丹參酮Ⅰ 87205-99-0價格Progesterone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)100 ul
轉基因品系大豆G94-1探針法qPCR試劑盒說明書Lactobacillus│plantarum分離基物: 發霉紅薯提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 6生長條件: 37℃存儲條件: -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法;其他
Bacillus│subtilis subsp. subtilis提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 蛋白酶(770U/ml)培養基: 0002生長條件: 30℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
黃直絲鏈霉菌種屬: Streptomyces│flavorectus提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: yes應用領域: 模式菌株。對產朊圓酵母和稻瘟菌菌絲有溶菌作用。培養基: 0012生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
Pleurotus│ostreatus (Jacq.) P. Kumm.分離基物: 組織塊提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 食用菌培養基: 14生長條件: 25-30存儲條件: 定期移植法
蘇云金芽孢桿菌種屬: Bacillus│thuringiensis提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 0002生長條件: 28-32℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
奇異變形桿菌種屬: Proteus│mirabilis提供形式: 其他安全等級: 2模式菌株: no培養基: CM0051生長條件: 37℃存儲條件: 真空冷凍干燥法
鏈霉菌種屬: Streptomyces│sp.分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 0012生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
Isaria│cicadae Miq.分離基物: 子實體提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 17生長條件: 28存儲條件: 定期移植法
Trametes│sp.分離基物: 闊腐提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 0017生長條件: 25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
標準操作步驟：
產品僅用于科研如非指出，所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。
1.液氮充分研磨樣品。
2.收集研磨成粉末的50mg樣品，置于1.5ml離心管中。
3.加入350μl65℃預熱的緩沖液IL，并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩，確保所有的組織團都分散均勻。
4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數次。
5.加入350μl氯仿，充分混勻，12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。
6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團或把組織碎片也一起轉移。
7.加入4μl RNase A，渦旋混勻。室溫放置2min。
8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無水乙醇，充分混勻。如：向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無水乙醇。
9.把上述混勻的液體轉移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結合DNA，棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請分兩次過柱。
10.將吸附柱重新套回收集管中，加入500μl緩沖液WB至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；
11.將吸附柱重新套回收集管中，加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；
注意：DNA Wash Buffer使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中，使用前須恢復到室溫。
12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g離心1min,棄去流出液；
13.將吸附柱重新套回2ml收集管中，*轉速（>13000×g）離心空結合柱1min以干燥柱子的基質；這一步對下面的洗脫步驟至關重要。
14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管，加入50-150μl65℃預熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min；
15. 室溫下，離心(>13000)1min，以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲于-20℃。
