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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應鑒定——PCR反應條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規參照基因，較佳地管家基因，優選地為RPPH1的擴增區域，其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產品：

奇異翅孢殼拉丁屬名: Emericellopsis mirabilis

異常漢遜酵母拉丁屬名: Hansenula  anomala

健康兔血清規格: 0.5ml

膠孢注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

葉際類芽孢桿菌拉丁屬名: Paenibacillus phyllosphaerae

氮還原類芽胞桿菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

大毛霉拉丁屬名: Mucor mucedo

頭葡萄球菌拉丁屬名: Staphylococcus capitis

鏈霉菌用途: 代謝產物具有抗菌活性。

短小芽胞桿菌拉丁屬名: Bacillus  pumilus

阿薩希絲孢酵母拉丁屬名: Trichosporon  asahii

葡萄糖桿菌屬拉丁屬名: Gluconobacter cerinus

小笠原德克斯酵母拉丁屬名: Derxomyces boninensis

米根霉拉丁屬名: Rhizopus  oryzae

芬氏纖維微菌拉丁屬名: Cellulosimicrobium funkei
開心果源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒說明書Anti-CEA 癌胚抗原單克隆(檢測)Multi-class antibodies規格： 0.1ml

小鼠熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Heat Shock Protein 70,Hsp-70 ELISA Kit特價供應

小鼠熱休克蛋白90(HSP-90)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Heat Shock Protein 90,Hsp-90 ELISA Kit特價促銷

小鼠熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Heat Shock Protein glycoprotein 96,HSP gp96 ELISA Kit特價供應

小鼠熱休克因子1(HSF1)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Heat Shock Factor 1,HSF1 ELISA Kit特價促銷

小鼠絨毛膜激素(CG)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Chorionic Gonadotrophin,CG ELISA Kit特價供應

PP2Ac 蛋白磷酸酶4(抗原)Multi-class antibodies規格： 0.5mg

CD5L 英文名稱： CD5L 0.2ml

Anti-DRP3 Dystrobrevin α蛋白Multi-class antibodies規格： 0.2ml

Calcitonin 大鼠降鈣素Multi-class antibodies規格： 48T

Anti-Phospho-p56Dok2(Tyr142) 磷酸化D酪氨酸激酶衰減蛋白2Multi-class antibodies規格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh NCF/NCF4/p40phox 嗜中性粒細胞胞漿因子4 規格 0.1ml

Human plasmin-antiplasmin complex,PAP ELISA Kit 人纖溶酶抗纖溶酶復合物 96T

phospho-SCNN1B(Thr615) 英文名稱： 磷酸化上皮鈉通道β2 0.1ml

小鼠可溶性CD30(sCD30)ELISA試劑盒 英文名稱：Mouse soluble cluster of differentiation 30,sCD30 ELISA Kit進口/原裝

小鼠可溶性CD30配體(sCD30L)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Soluble Cluster of differentiation 30 ligand,sCD30L ELISA Kit 進口/原裝

小鼠可溶性CD86(B7-2/sCD86)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse soluble Cluster of differentiation 86,sCD86 ELISA Kit進口/原裝

小鼠可溶性Endoglin(ENG/sCD105)ELISA試劑盒 英文名稱：Mouse Soluble Endoglin,ENG/sCD105 ELISA Kit 特價供應

小鼠可溶性P選擇素(sP-selectin)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse soluble P-selectin,sP-selectin ELISA Kit特價促銷

Connexin-43(Cx43) 間隙連接蛋白43(多肽片斷抗原)Multi-class antibodies規格： 0.5mg

Anti-CCL20/MIP3 alpha 巨噬細胞炎性蛋白20Multi-class antibodies規格： 0.1ml

CUEDC1 英文名稱： CUE結構域蛋白1 0.2ml

Anti-Phospho-FLT3 (Tyr589/591) 磷酸化FMS樣酪氨酸激酶3Multi-class antibodies規格： 0.1ml

prolactin 小鼠催乳素Multi-class antibodies規格： 48T

Anti-Fc gamma RII a/CD32a 免疫球蛋白G Fc段受體ⅡMulti-class antibodies規格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-rat IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記的小鼠抗大鼠IgG 規格 0.1ml

OJ/IleRS(Human anti-OJ-antibody) ELISA Kit 人OJ/抗異亮酰tRNA合成酶 96T

phospho-SLP76 (Tyr145) 英文名稱： 磷酸化淋巴細胞胞漿蛋白2 0.1ml