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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應鑒定——PCR反應條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規參照基因，較佳地管家基因，優選地為RPPH1的擴增區域，其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產品：

抗生鏈霉菌FBLN5 (Fibulin 5) ELISA Kit用途: 拮抗菌

生黃色鏈霉菌MMP-10 (Matrix Metalloproteinase 10) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces chromoflavus

米曲霉PF4 (Platelet Factor 4) ELISA Kit 拉丁屬名: Aspergillus  oryzae

鮑姆桑黃GPIIb/IIIa (Platelet Membrane Glycoprotein IIb/IIIa) ELISA Kit拉丁屬名: Sanghuangporus baumii

平臍蠕孢菌SSFA2 (Sperm Specific Antigen 2) ELISA Kit 用途: 研究

亮白曲霉UPP2 (Uridine Phosphorylase 2) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus candidus Link

羅爾夫青霉T4 (Thyroxine) ELISA Kit拉丁屬名: Penicillium rolfsii

扣囊復膜孢酵母GHRH (Growth Hormone Releasing Hormone) ELISA Kit拉丁屬名: Saccharomycopsis fibuligera

擬棒形節叢孢HSF1 (Heat Shock Transcription Factor 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Arthrobotrys pseudoclavata

柱隔孢菌PIIINP (N-Terminal Procollagen Ⅲ Propeptide) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

克魯斯假絲酵母IGFBP-7 (Insulin Like Growth Factor Binding Protein 7) ELISA Kit拉丁屬名: Candida  krusei

大腸埃希氏桿菌 PSAP (Prosaposin) ELISA Kit 拉丁屬名: Escherichia  coli

樟疫霉NUP160 (Nucleoporin 160kDa) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

克雷伯氏菌屬PROC (Protein C) ELISA Kit拉丁屬名: Klebsiella sp.

枯草芽胞桿菌PYY (Peptide YY) ELISA Kit用途: 分類 研究
奧爾森派琴蟲探針法熒光定量PCR試劑盒規格轉移生長因子–β受體2 Anti-TGF-βR 2 0.1ml

SHFM3 英文名稱： SHFM3蛋白 0.2ml

Yellow fever virus envelope glycoprotein E 英文名稱： 黃熱病毒包膜糖蛋白 0.1ml

Rhesus antibody Rh Phospho-LATS1 (Ser909) 磷酸化抑制基因LATS1 規格 0.1ml

OGP (Ostegenic Growth Peptide) 成骨生長肽 (骨生長激素肽)(蛋白多肽)Multi-class antibodies規格： 0.5mg

EphB6 英文名稱： 酪酸蛋白激酶受體B6 0.1ml

包含氧化還原酶的WW域 Anti-WWOX 0.1ml

CABP5 英文名稱： 鈣結合蛋白5/3 0.2ml

Anti-Phospho-eIF2 alpha (Ser51) 磷酸化真核啟動因子2αMulti-class antibodies規格： 0.1ml

Bcl-2 大鼠Bcl-2Multi-class antibodies規格： 48T

Anti-Phospho-p56Dok2(Tyr351) 磷酸化D酪氨酸激酶衰減蛋白2Multi-class antibodies規格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Nck1/NCK alpha NCK銜接蛋白1 規格 0.2ml

Human anti-thrombin receptor,ATR ELISA Kit 人抗凝血酶受體 96T

S100B 英文名稱： S100B蛋白 0.1ml

Anti-Calpain 2 鈣激活的中性蛋白酶2Multi-class antibodies規格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh PDGFRA 血小板源性生長因子受體A(PDGFRα) 規格 0.1ml

Apolipoprotein D 濃縮液 0.1ml 進口分裝

TRAIL 英文名稱： 壞死因子相關凋亡誘導配體 0.1ml

CEA 英文名稱： 癌胚抗原 0.1ml

Anti-Calpain 2 鈣激活的中性蛋白酶2Multi-class antibodies規格： 0.1ml

小鼠轉化生長因子α(TGF-α)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse transforming growth factor α,TGF-α ELISA Kit進口/原裝

Chicken IgY 英文名稱： 兔抗雞IgY 1mg

Anti-GATA-5 GATA結合蛋白5Multi-class antibodies規格： 0.2ml

APF(Human anti-perinuclear factor) ELISA Kit 人抗核周因子Multi-class antibodies規格： 48T

Anti-IL-28A/IFNL2 白細胞介素28AMulti-class antibodies規格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh LRRC41 LRRC41蛋白 規格 0.2ml

HA(Human hemagglutinin) ELISA Kit 人血凝素 96T

Phospho-Rb (Thr826) 英文名稱： 磷酸化視網膜母細胞瘤相關蛋白1 0.1ml