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PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無(wú)熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。步驟(2)為：待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
客戶只需提供樣品和待檢測(cè)名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

枯草芽孢桿菌EP2 (Prostaglandin E Receptor 2 ) ELISA Kit  拉丁屬名: Bacillus  subtilis

釀酒酵母FSHR (Follicle Stimulating Hormone Receptor) ELISA Kit 拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae

立枯絲核菌SMN1(Survival of Motor Neuron 1, Telomeric) ELISA Kit 用途: 進(jìn)行分析檢測(cè)及抗病性鑒定，指導(dǎo) 。

韓國(guó)靈芝α-Glu (Alpha Glucosidase) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

玫瑰栗色鏈霉菌ELN (Elastin) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces  roseocastaneus

側(cè)耳屬SPA (Pulmonary Surfactant Associated Protein A) ELISA Kit 注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

桿狀毛霉GKN2 (Gastrokine 2) ELISA Kit 拉丁屬名: Mucor bacilliformis

囊軸發(fā)仙菌囊軸亞種Surv (Survivin) ELISA Kit拉丁屬名: Pilimelia columellifera subsp. columellifera

微菌核鏈霉菌IκBβ (Inhibitory Subunit of NF Kappa B Beta) ELISA Kit 拉丁屬名: Streptomyces minutiscleroticus

須芒草伯克霍爾德氏菌PKR2 (Prokineticin Receptor 2) ELISA Kit 拉丁屬名: Burkholderia andropogonis

樣品粉碎機(jī)CTLA4 (Cytotoxic T Lymphocyte Associated Antigen 4) ELISA Kit規(guī)格: 便攜式

產(chǎn)紫青霉sCKR (Soluble Cytokine Receptor) ELISA Kit拉丁屬名: Penicillium purpurogenum

大腸埃希菌HSF2 (Heat Shock Transcription Factor 2) ELISA Kit 拉丁屬名: coli

蘑菇β-CTx (Beta Crosslaps) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

Burkholderia anthinaFGF19 (Fibroblast Growth Factor 19) ELISA Kit用途: 固氮。
石膏樣小孢子菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒說(shuō)明書Tankyrase  端粒調(diào)控因子抗體地黃苦苷1-Cyclohexene-1-carboxylicacid, 3-(b-D-glucopyranosyloxy)-2,6,6-trimethyl-,(3R)-化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C16H26O8 分 子 量:

ART5  二磷酸腺苷核糖基轉(zhuǎn)移酶5抗體黃曲霉毒素G11H,12H-Furo[3',2':4,5]furo[2,3-h]pyrano[3,4-c][1]benzopyran-1,12-dione,3,4,7a,10a-tetrahydro-5-methoxy-, (7aR,10aS)-化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C17H12O7 分 子 量: 328.27298

ASB13  含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族13抗體乙醇溶液(75%)標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

ASC2/POP1  感染性蛋白*蛋白1抗體DL-谷氨酸DL-Glutamic acid氨基酸類 分 子 式: C5H9NO4 分 子 量: 147.12926

ATAD3A/B/C  三磷酸腺苷酶家族蛋白3A抗體5-羥基-7-乙酰氧基黃酮5-Hydroxy-4-oxo-2-phenyl-4H-chromen-7-yl acetate對(duì)照藥材 分 子 式: C17H12O5 分 子 量: 296.27418

MAP4K6/MINK1  絲裂原活化蛋白激酶MAP4K6抗體Tris-HCl緩沖液(1.5mol/L,pH8.8)標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

ATAD2  三磷酸腺苷酶家族蛋白2抗體1,4-二氫-1,2-二甲基-4-氧代-3-喹啉羧酸1,2-Dimethyl-4-oxo-1,4-dihydroquinoline-3-carboxylic acid對(duì)照藥材 分 子 式: C12H11NO3 分 子 量: 217.22064