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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應鑒定——PCR反應條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規參照基因，較佳地管家基因，優選地為RPPH1的擴增區域，其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產品：

異常漢遜酵母ABCG2 (ATP Binding Cassette Transporter G2) ELISA Kit 拉丁屬名: Hansenula  anomala

巨大芽胞桿菌NPHN (Nephrin) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

秦氏蜜環菌OXA (Orexin A) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

黃孢平革菌AR (Androgen Receptor) ELISA Kit用途: 產胞外NADH過氧化物酶(produces extracellular NADH-oxidizing peroxidase) 合成及降解3、4-二甲氧苯甲基乙(synthesis and degradation of veratryl alcohol ) 轉變甘油三硝酸酯為一硝酸酯(converts glyceryl trinitrate to glyceryl 2-mononitrate) 降解2,4,5-T (degrades 2,4,5-trichlorophenoxyacetic acid (2

假根蘑菇AQP-2 (Aquaporin 2) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

枯草芽胞桿菌MAP-2 (Microtubule Associated Protein 2) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus subtilis

枯草芽孢桿菌NUP50 (Nucleoporin 50kDa) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus subtilis

枯草芽孢桿菌Bcl2L11 (Bcl-2 Like Protein 11) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus subtilis

相思根瘤菌MAG Ab (Anti-Myelin Associated Glycoprotein Antibody) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

枯草芽孢桿菌OBTF1 (Octamer Binding Transcription Factor 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Bacillus subtilis

大腸埃希菌PYY (Peptide YY) ELISA Kit拉丁屬名: coli

產氣莢膜梭菌       毒素C型NT-4 (Neurotrophin 4) ELISA Kit 拉丁屬名: perfringens       Type C

韌革菌屬OCLN (Occludin) ELISA Kit  拉丁屬名: Stereum sp.

Lysinibacillu xylanilyticusPCDHγA2 (Protocadherin Gamma A2) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

陰溝腸桿菌ACA-IgM (Anti-Cardiolipin Antibody IgM) ELISA Kit拉丁屬名: Enterobacter cloacae subsp. cloacae
溶血性曼氏桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒供應商YES1  原癌基因酪氨酸蛋白激酶Yes1抗體蒿草酚A[3,4'-Bibenzofuran]-6,6'-diol,3'-(3,5-dihydroxyphenyl)-4-[(2S,3S,4R,5S)-4-(3,5-dihydroxyphenyl)tetrahydro-2,5-bis(4-hydroxyphenyl)-3-furanyl]-2,2',3,3'-tetrahydro-2,2'-bis(4-hydroxyphenyl)-,(2S,2'R,3S,3'R)-化學標準品 分 子 式: C56H44O13 分 子 量: 924.940760000001

phospho-YES1(Tyr426)  磷酸化原癌基因酪氨酸蛋白激酶Yes1抗體托品醇異丁酯Propanoic acid,2-methyl-, (3-endo)-8-methyl-8-azabicyclo[3.2.1]oct-3-yl ester化學標準品 分 子 式: C12H21NO2 分 子 量: 211.30064

phospho-YES1(Tyr537)  磷酸化原癌基因酪氨酸蛋白激酶Yes1抗體柳杉酚； 10-脫氧代黃檜醇9(1H)-Phenanthrenone,2,3,4,4a,10,10a-hexahydro-6-hydroxy-1,1,4a-trimethyl-7-(1-methylethyl)-,(4aS,10aS)-化學標準品 分 子 式: C20H28O2 分 子 量: 300.43512

Anthrax  炭疽桿菌抗體棕櫚酸乙酯Ethyl palmitate中藥標準品  分 子 式: C18H36O2 分 子 量: 284.47724

Anthrax  炭疽菌抗體（采用活疫苗制備）(24Z)-3,4-開環甘遂-4(28),7,24-三烯-3,26-二酸3,4-Secotirucalla-4(28),7,24-triene-3,26-dioic acid化學標準品 分 子 式:  分 子 量:

SARM1  SARM1蛋白抗體牡荊素葡萄糖苷Glucosyl-vitexin中藥標準品  分 子 式: C27H30O16 分 子 量: 610.5175

SAMD9  SAMD9蛋白抗體8-氧黃連堿2,3,9,10-dimethylenedioxy-8-oxoprotoberberine中藥標準品  分 子 式: C19H13NO5 分 子 量: 335.31