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客戶只需提供樣品和待檢測(cè)名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。步驟(2)為：待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

扣囊復(fù)膜孢酵母Monkey LPL (Lipoprotein Lipase) ELISA Kit拉丁屬名: Saccharomycopsis fibuligera

宇佐美曲霉Monkey ENA-78 (Epithelial Neutrophil Activating Peptide 78) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus  usamii

黑曲霉Monkey c-jun ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus niger

枯草芽胞桿菌Monkey Fcγ (Fc Fragment of IgG) ELISA Kit 拉丁屬名: subtilis

盔狀畢赤酵母Monkey ATF-2 (Activating Transcription Factor 2) ELISA Kit 拉丁屬名: Pichia galeiformis

大腸埃希菌Monkey NOS3/eNOS (Nitric Oxide Synthase 3, Endothelial) ELISA Kit拉丁屬名: coli

嗜冷生孢八疊球菌Monkey MAG (Myelin Associated Glycoprotein) ELISA Kit拉丁屬名: Sporosarcina psychrophila

發(fā)根土壤桿菌（發(fā)根植物單胞菌）（現(xiàn)1）Monkey NADPH (Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate) ELISA Kit 拉丁屬名: Agrobacterium rhizogenes(Riker et al.)Conn

灰毛青霉Monkey Ras-GAP1 (Rac-GTPase Activating Protein 1) ELISA Kit 注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

褐黃木耳（琥珀木耳）Monkey EPYC (Epiphycan) ELISA Kit拉丁屬名: Auricularia fuscosuccinea

Paenibacillus thailandensisMonkey TS/TYMS (Thymidylate Synthetase) ELISA Kit拉丁屬名: Paenibacillus thailandensis

柄籃狀菌Monkey ASGR2 (Asialoglycoprotein Receptor 2) ELISA Kit拉丁屬名: Talaromyces stipitatus

巨大芽孢桿菌Monkey ARRβ1 (Arrestin Beta 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Bacillus  megaterium

解淀粉芽孢桿菌Monkey IL-17 (Interleukin 17) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus  amyloliquefaciens

雞油菌Monkey IGFBP-5 (Insulin Like Growth Factor Binding Protein 5) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用
嗜血桿菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒 DPEP3  膜二肽酶3抗體人參環(huán)氧炔醇1-Octene-4,6-diyn-3-ol,8-[(2R,3S)-3-heptyl-2-oxiranyl]-, (3R)-化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C17H24O2 分 子 量:

DSN1  著絲粒相關(guān)蛋白DSN1抗體羅漢果皂苷ⅡA2b-D-Glucopyranoside, (3b,9b,10a,11a,24R)-11,24,25-trihydroxy-9-methyl-19-norlanost-5-en-3-yl6-O-b-D-glucopyranosyl- (9CI)中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C42H72O14 分 子 量: 801.01268

DUSP13  雙特異性磷酸酶13抗體胡黃連苷II6-Vanilloylcatalpol中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C23H28O13 分 子 量: 512.46062

Flotillin 1  脂閥結(jié)構(gòu)蛋白1抗體苦蒿素2(5H)-Furanone,4-[2-[(1S,2R,4aS,7S,8aR)-4a-[(acetyloxy)methyl]-1,2,3,4,4a,7,8,8a-octahydro-7-hydroxy-5-(hydroxymethyl)-1,2-dimethyl-1-naphthalenyl]ethyl]-中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C22H32O6 分 子 量:

GAJ/MND1  減數(shù)分裂核分裂蛋白1抗體蘇式-1-C-丁香酚基丙三醇1,2,3-Propanetriol,1-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-, (1R,2R)-rel-對(duì)照藥材 分 子 式: C11H16O6 分 子 量: 244.24114

GLP2R  胰素樣肽2受體抗體半枝蓮堿Scutebarbatine A中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C32H34N2O7 分 子 量: 558.6

AMPK beta 1  腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1抗體血竭素高氯酸鹽DRACORHODIN PEROCHLORATE中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C17H15O3+.CH4 分 子 量: 283.34166