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PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

堅強芽孢桿菌Monkey PKP2 (Plakophilin 2) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus firmus

Mucilaginibacter sp.Monkey RPA-70 (replication protein A) ELISA Kit拉丁屬名: Mucilaginibacter sp.

大腸埃希菌Monkey GP39 (Glycoprotein 39, Cartilage) ELISA Kit拉丁屬名: coli

米曲霉Monkey NKB (Neurokinin B) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus oryzae

普通變形菌Monkey GMFβ (Glia Maturation Factor, Beta) ELISA Kit 拉丁屬名: Proteus vulgaris

異配囊接霉Monkey NPYR2 (Neuropeptide Y Receptor Y2) ELISA Kit拉丁屬名: Mucor heterogamus

香菇Monkey MRP1 (Multidrug Resistance Associated Protein 1) ELISA Kit用途: 試驗栽培

頭孢霉Monkey STMN1 (Stathmin 1) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

涇陽鏈霉菌Monkey CALU (Calumenin) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces jingyangensis Tao et al.

窄食單胞菌Monkey FⅫa (Activated Coagulation Factor Ⅻ) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

橙鱗傘Monkey 5-NT (5-Nucleotidase) ELISA Kit用途: 微毒、科研

球形芽孢桿菌Monkey ApoC4 (Apolipoprotein C4) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus  sphaericus

韓國叢毛單胞菌Monkey PA-IgM (Platelet Associated Antibody) ELISA Kit拉丁屬名: Comamonas koreensis

肉糜  貂源性成分（定性）Monkey ELA3B (Elastase 3B) ELISA Kit拉丁屬名: 肉糜  貂源性成分（定性）

意外鏈霉菌Monkey TA (Anti-Teichoic Acid Antibody) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces paradoxus
人多瘤病毒9探針法熒光定量PCR試劑盒 Angiotensin I/Angiotensinogen  緊張素I抗體烏藥環(huán)戊烯二酮Dodec-4-en-2-one中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C12H22O 分 子 量: 182.30248

Angiotensin II  緊張素Ⅱ抗體雷公藤乙素Tripdiolide中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C20H24O7 分 子 量: 376.40

NEEP21  NEEP21蛋白抗體異綠原酸CIsochlorogenic acid C中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C27H28O10 分 子 量: 512.50522

phospho-Filamin A/FLNA (Tyr1046)  磷酸化細(xì)絲蛋白A抗體(+)-異胡薄荷醇Cyclohexanol,5-methyl-2-(1-methylethenyl)-, (1S,2R,5S)-化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C10H18O 分 子 量: 154.24932

Angiotensin III  緊張素III抗體豆甾烷-3，6-二醇Stigmastane-3,6-diol對照藥材 分 子 式: C29H52O2 分 子 量: 432.72198

FAM129B  FAM129B蛋白抗體大黃酸4,5-Dihydroxy-9,10-dioxo-9,10-dihydroanthracene-2-carboxylic acid中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C15H8O6 分 子 量: 284.22042

FAM82A1/RMD2  微管動力調(diào)節(jié)蛋白2抗體烏發(fā)醇Uvaol對照藥材 分 子 式: C30H50O2 分 子 量: 442.7168