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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

沙漠畢赤酵母Monkey RELB (V-Rel Reticuloendotheliosis Viral Oncogene Homolog B) ELISA Kit拉丁屬名: Pichia deserticola

灰色鏈霉菌Monkey DDC (Dopamine Decarboxylase) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces griseus

點枝頂孢Monkey Smad1/MADH1 (Mothers Against Decapentaplegic Homolog 1) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

阿舒假囊酵母Monkey LCN1 (Lipocalin 1) ELISA Kit用途: 核黃素(Vitamin2)產(chǎn)生菌

朱紅叢赤殼Monkey CD30L (Cluster of Differentiation 30 Lligand) ELISA Kit 拉丁屬名: Nectria cinnabarina

*蟲擬蠟菌Monkey ADA (Adenosine Deaminase) ELISA Kit拉丁屬名: Ceriporiopsis Subvermispora

棒彎孢Monkey TXLNa (Taxilin Alpha ) ELISA Kit 拉丁屬名: Curvularia clavata B.L. Jain

白腐菌Monkey PLD2 (Phospholipase D2) ELISA Kit用途: 飼料用酶的篩選

炭疽刺盤孢菌Monkey INSL5 (Insulin Like Protein 5) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

仁果叢梗孢Monkey FSH (Follicle-Stimulating Hormone) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

枯草芽孢桿菌Monkey CASP 9 (Caspase 9) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus subtilis

冷海希瓦氏菌Monkey DPP4 (Dipeptidyl Peptidase IV) ELISA Kit拉丁屬名: Shewanella  frigidimarina

費氏中華根瘤菌Monkey ANXA2 (Annexin A2) ELISA Kit用途: 產(chǎn)酸，能與我國栽培大豆共生固氮

肉座菌屬Monkey NPHN (Nephrin) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

大黃歐文氏菌Monkey GSTω1 (Glutathione S Transferase Omega 1) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用
人多瘤病毒6探針法熒光定量PCR試劑盒說明書CTAGE4  皮膚T細胞相關(guān)抗原4抗體Delta 7-avenasterolStigmasta-7,24(28)-dien-3-ol,(3b,*,24Z)-化學(xué)標準品 分 子 式: C29H48O 分 子 量: 412.69082

FAM40A  FAM家族蛋白40A抗體苦鬼臼毒素Picropodophyllin中藥標準品  分 子 式: C22H22O8 分 子 量: 414.40528

FAM120B  組織激活過氧化酶活化增生受體γ蛋白抗體氨基黑10B染色液標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

FAM55D  FAM55D蛋白抗體藏紅花酸Crocetin中藥標準品  分 子 式: C20H24O4 分 子 量: 328.40216

TAAL6  相關(guān)蛋白抗原L6抗體三葉豆紫檀苷TRIFOLIRHIZIN中藥標準品  分 子 式: C22H22O10 分 子 量: 446.4

FAM46C  FAM46C蛋白抗體3,4-二甲氧基苯甲酸3,4-Dimethoxybenzoic acid脂肪酸類 分 子 式: C9H10O4 分 子 量: 182.1733

FAM168A/TCRP1  舌癌耐藥相關(guān)蛋白1四氫姜黃素Tetrahydrocurcumin中藥標準品  分 子 式: C21H24O6 分 子 量: 372.41166