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PCR反應鑒定——PCR反應條件:

客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據分析，提供實驗報告給您。

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質粒載體為本領域常規(guī)質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下列是公司正在熱銷的產品：

威斯康星米勒菌Monkey GLα (Galactosidase Alpha) ELISA Kit拉丁屬名: Moellerella wisconsensis

大靑湖金黃桿菌Monkey FRS3 (Fibroblast Growth Factor Receptor Substrate 3) ELISA Kit 拉丁屬名: Chryseobacterium  daecheongense

塔賓曲霉Monkey M-AChR M3 (Muscarinic Acetylcholine Receptor M3) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus  tubingensis

葡萄暗擬棒束梗霉Monkey PAI2 (Plasminogen Activator Inhibitor 2 )ELISA Kit 拉丁屬名: Phaeoisariopsis vitis (Lév.) Sawada

中國漢納酵母Monkey CA6 (Carbonic Anhydrase VI) ELISA Kit拉丁屬名: Hannaella sinensis

沙福芽孢桿菌Monkey FPB (Fibrinopeptide B) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus safensis

大豆慢生根瘤菌Monkey CK-17/KRT17 (Cytokeratin 17) ELISA Kit用途: 與大豆共生固氮,培養(yǎng)基pH4.5生長

希瓦氏菌*Monkey pIκBα (Phospho-Inhibitory Subunit Of NF Kappa B Alpha) ELISA Kit 拉丁屬名: Shewanella putrefaciens

白乳菇Monkey MAN1A1 (Mannosidase Alpha Class 1A Member 1) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

Termitomyces bulborhizus Monkey MLCK/MYLK (Myosin Light Chain Kinase) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

白假絲酵母Monkey CTSC (Cathepsin C) ELISA Kit拉丁屬名: Candida albicans

米根霉Monkey SIGLEC12 (Sialic Acid Binding Ig Like Lectin 12) ELISA Kit拉丁屬名: Rhizopus oryzae Went et Prinsen-Geerligs

雞毒、滑液支原體（-）陰性血清Monkey AMY1 (Amylase Alpha 1, Salivary) ELISA Kit規(guī)格: 0.5ml

耐冷冷桿菌Monkey iPLA2 (Phospholipidase A2, Calcium Independent) ELISA Kit拉丁屬名: Cryobacterium  psychrotolerans

臭曲霉Monkey CNTN3 (Contactin 3) ELISA Kit 拉丁屬名: Aspergillus  foetidus
螺桿菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒 phospho-NUDC(Ser326)  磷酸化細胞核分離基因C蛋白抗體茄尼醇solanesol中藥標準品  分 子 式: C45H74O 分 子 量: 631.06846

NUP160  核孔蛋白NUP160抗體馬兜鈴內酰胺BIIIDibenz[cd,f]indol-4(5H)-one,1,2,9-trimethoxy- 化學標準品 分 子 式: C18H15NO4 分 子 量: 309.316

Ninein/GSK3B interacting protein  GSK3B相互作用蛋白抗體地黃苷Martynoside對照藥材 分 子 式: C31H40O15 分 子 量: 652.6403

RASSF7  RAS家族關聯(lián)結構域蛋白7抗體磺胺醋酰N-((4-Aminophenyl)sulfonyl)acetamide 高端化學試劑 分 子 式: C8H10N2O3S 分 子 量: 214.2416

SKA1  紡錘體和著絲粒相關蛋白1抗體鉤吻素子7,20(2H,19H)-Cyclovobasan, 1,2,18,19-tetradehydro-3,17-epoxy-, (3R,7alpha,20alpha)-中藥標準品  分 子 式: C20H22N2O 分 子 量: 306.40148

SKA2  紡錘體和著絲粒相關蛋白2抗體黃芩苷Baicalin中藥標準品  分 子 式: C21H18O11 分 子 量: 446.36

SKA3  紡錘體和著絲粒相關蛋白3抗體馬兜鈴內酰胺AAdenosine,2'-deoxy-N-(5,6-dihydro-8-methoxy-5-oxobenzo[f]-1,3-benzodioxolo[6,5,4-cd]indol-7-yl)-化學標準品 分 子 式: C27H22N6O7 分 子 量: 542.49958