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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

松鼠葡萄球菌Monkey GSP (Glycosylated Serum Protein) ELISA Kit拉丁屬名: Staphylococcus sciuri

Pseudomonas batumici Monkey APAF-1 (Apoptosis Protease Activating Factor-1) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

少孢哈薩克斯坦酵母Monkey Aβ1-40 (Amyloid Beta Peptide 1-40) ELISA Kit拉丁屬名: Kazachstania exigua

玫煙色棒束孢Monkey C3bR (Complement Fragment 3b Receptor) ELISA Kit拉丁屬名: Isaria fumosorosea

Bacillus sp.Monkey Dyn (Big Dynorphin) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus sp.

海假交替單胞菌Monkey PLSCR2 (Phospholipid Scramblase 2) ELISA Kit 拉丁屬名: Pseudoalteromonas marina

多主葡萄殼菌Monkey HYOU1 (Hypoxia Up Regulated 1) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

芽胞桿菌Monkey AIG1 (Androgen Induced Protein 1) ELISA Kit 用途: 分類、研究，具有處理富營養(yǎng)水體和養(yǎng)殖廢水潛力。

多粘類芽孢桿菌Monkey COL15 (Collagen Type XV) ELISA Kit 拉丁屬名: Paenibacillus  polymyxa

金黃色葡萄球菌金黃亞種Monkey CD40L/TNFSF5 (Cluster of Differentiation 40 Ligand) ELISA Kit拉丁屬名: Staphylococcus aureus subsp. aureus

釀酒酵母Monkey EIPS2 (Estrogen Induced Protein pS2) ELISA Kit拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

枯草芽孢桿菌Monkey F12 (Coagulation Factor Ⅻ) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus  subtilis

雞新城疫病毒血凝抑制試驗（HI）陽性血清Monkey COLEC11 (Collectin Sub-Family Member 11) ELISA Kit規(guī)格: 2ml

黑曲霉Monkey TAF2 (TATA Box Binding Protein Associated Factor 2) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus  niger

黃桿菌Monkey Grb2 (Growth Factor Receptor Bound Protein 2) ELISA Kit 拉丁屬名: Flavobacterium sp.
單孢子蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒 NEK8  絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶NEK8抗體芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷-6'-乙酯7-O-beta-D-Glucuronoside,Et ester-4',5,7-Trihydroxyflavone中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C23H22O11 分 子 量: 474.414

NSP5  核結(jié)構(gòu)蛋白5抗體CTAB抽提液標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

n-Myc  致癌基因n-Myc抗體苦參醇XKushenol X化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C25H28O7 分 子 量: 440.48562

NUBP1  核苷酸結(jié)合蛋白1抗體改良臺氏液粉劑(無鈣)標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

NUBP2  核苷酸結(jié)合蛋白2抗體卵黃鹽水標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

NUP37  核孔蛋白Nup37抗體3-乙酰基-beta-乳香酸3-Acetyl-尾-boswellic acid化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C32H50O4 分 子 量: 498.737

PARD6B  缺陷性分配同源物β抗體10-去乙酰紫杉醇;7-表-去乙酰基紫杉醇Deacetyltaxol中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C45H49NO13 分 子 量: 811.87