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PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

硬桿菌CX40 (Connexin 40) ELISA Kit 拉丁屬名: Arthrobacter  scleromae

鞘氨菌COL10 (Collagen Type X) ELISA Kit 拉丁屬名: Sphingobium  sp.

*灰葡萄孢FGF6 (Fibroblast Growth Factor 6) ELISA Kit 用途: 進(jìn)行分析檢測及抗病性鑒定，指導(dǎo) 。

糞腸球菌C1qR1 (Complement Component 1q Receptor) ELISA Kit 拉丁屬名: faecalis

毛霉屬NOS1/nNOS (Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal) ELISA Kit拉丁屬名: Mucor  sp.

弓形蟲(GJS-3株)C5b (Complement Fragment 5b) ELISA Kit拉丁屬名: gondii

北京擲孢酵母GSTs (Glutathione S-Transferases) ELISA Kit拉丁屬名: Sporobolomyces beijingensis

蓋替隱球酵母Ras-GAP1 (Rac-GTPase Activating Protein 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Cryptococcus gattii

淺灰小雙孢菌TNPO1 (Transportin 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Microbispora griseola

廣西腐霉UBAP2 (Ubiquitin Associated Protein 2) ELISA Kit拉丁屬名: Pythium guangxiense

黑曲霉IL-13 (Interleukin 13) ELISA Kit 拉丁屬名: Aspergillus  niger

空腸彎曲桿菌EJ/GlyRS (Anti-EJ-Antibody) ELISA Kit拉丁屬名: jejuni

近緣毛殼AATF (Apoptosis Antagonizing Transcription Factor) ELISA Kit 拉丁屬名: Chaetomium subaffine

鞘氨桿菌cPLA2 (Cytosolic Phospholipase A2) ELISA Kit拉丁屬名: Sphingobacterium  sp.

釀酒酵母BECN1 (Beclin 1) ELISA Kit拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae
羊闊盤吸蟲探針法熒光定量PCR試劑盒供應(yīng)商DMTF1  周期素D相互作用蛋白1抗體槲皮素-3-O-β-D-葡糖糖-7-O-β-D-龍膽雙糖苷中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式:  分 子 量:

GMCL1L  生殖細(xì)胞樣蛋白1樣蛋白抗體草質(zhì)素苷Rhodionin中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C21H20O11 分 子 量: 448.3769

KLLN   Killin-p53調(diào)節(jié)復(fù)制抑制蛋白抗體四氫鴨腳木堿TETRAHYDROALSTONINE對照藥材 分 子 式: C21H24N2O3 分 子 量: 352.42686

HFREP1/FGL1  肝細(xì)胞源性纖維蛋白原相關(guān)蛋白1抗體D-葡萄糖醛酸(2S,3S,4S,5R)-2,3,4,5-Tetrahydroxy-6-oxohexanoic acid化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C6H10O7 分 子 量: 194.1394

Fibrinogen gamma chain  人纖維蛋白原γ鏈抗體EDTA溶液(2%,pH7.0)標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

Fibrinopeptide B  纖維蛋白肽B抗體（血纖肽B）塔拉薩敏talatisamine中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C24H39NO5 分 子 量: 421.57016

Mitochondrial ribosomal protein L11  線粒體核糖體蛋白L11抗體3-羥基-2-甲基-4-吡喃酮3-Hydroxy-2-methyl-4H-pyran-4-one對照藥材 分 子 式: C6H6O3 分 子 量: 126.11004