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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應鑒定——PCR反應條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規參照基因，較佳地管家基因，優選地為RPPH1的擴增區域，其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產品：

異常漢遜酵母PC/CPG (Choline Phosphoglyceride) ELISA Kit拉丁屬名: Hansenula  anomala

粟酒裂殖酵母TXLNb (Taxilin Beta) ELISA Kit 拉丁屬名: Schizosaccharomyc pombe

深凹杯傘AMY1 (Amylase Alpha 1, Salivary) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

槐生多年臥孔菌C4a (Complement Component 4a) ELISA Kit用途: 藥用。具有，誘導細胞調亡，誘導機體產生多種細胞因子，等作用。

綠色木霉β2-GP1 Ab IgG (β2-Glycoprotein 1 Antibody IgG) ELISA Kit拉丁屬名: Trichoderma  viride

鴨疫里氏桿菌GREM1 (Gremlin 1) ELISA Kit 拉丁屬名: anatipestifer

皮殼青霉ELMO2 (Engulfment And Cell Motility 2) ELISA Kit 拉丁屬名: Penicillium crustaceum

麥根腐平臍蠕孢MAGE (Melanoma-associated Antigen) ELISA Kit用途: 教學科研

大腸桿菌MR (Mannose Receptor) ELISA Kit拉丁屬名: Escherichia coli

多主葡萄殼菌PRDX2 (Peroxiredoxin 2) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

耐寒短桿菌STK39 (Serine/Threonine Kinase 39) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

大腸埃希氏菌PCK1 (Phosphoenolpyruvate Carboxykinase 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Escherichia coli

中間普氏菌MRP (Multidrug Resistance-Associated Protein) ELISA Kit拉丁屬名: Prevola intermedia

平田頭菇3-1HSP-60/HSPD1 (Heat Shock Protein 60) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

鐮雄腐霉LMWH (Low Molecular Weight Heparin) ELISA Kit拉丁屬名: Pythium falciforme
馬病毒3型探針法熒光定量PCR試劑盒供應商CTAGE5  皮膚T細胞相關抗原5抗體（表達抗原6）9,10-二苯基蒽9,10-Diphenylanthracene 高端化學試劑 分 子 式: C26H18 分 子 量: 330.42112

AGPAT1  溶血磷脂?；D移酶抗體5-甲基間苯二酚5-Methylbenzene-1,3-diol對照藥材 分 子 式: C7H8O2 分 子 量: 124.13722

EBAG9/RCAS1  相關表面抗原RCAS1抗體酸性磷酸酶封閉液(100×)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

FAM120C  構成激活過氧化酶活化增生受體γ樣蛋白2抗體1,4-二[4-(葡萄糖氧)芐基]-2-異丁基蘋果酸酯b-D-Glucopyranoside,[(2R)-2-hydroxy-2-(2-methylpropyl)-1,4-dioxo-1,4-butanediyl]bis(oxymethylene-4,1-phenylene)bis-化學標準品 分 子 式: C34H46O17 分 子 量: 726.71884

MUM1/FLJ14868  突變的相關抗原1抗體茵芋堿Furo[2,3-b]quinoline,4,7,8-trimethoxy-中藥標準品  分 子 式: C14H13NO4 分 子 量: 259.25732

FMNL1  成蛋白相關蛋白1抗體黑芥子硫苷酸鉀一水b-D-Glucopyranose, 1-thio-,1-[N-(sulfooxy)-3-butenimidate], monopotassium salt, monohydrate, (Z)- (9CI)中藥標準品  分 子 式: C10H16NO9S2- 分 子 量: 358.36534

GAGE7/Cancer/testis antigen family 4 member 7  /睪丸抗原家族4亞型7抗體藤黃占噸酮 E9H-Xanthen-9-one,2-[(2E)-3,7-dimethyl-2,- 6-octadienyl]-3,4,6,8-tetrahydroxy-1-(3- methyl-2-butenyl)- 對照藥材 分 子 式:  分 子 量: