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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應鑒定——PCR反應條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規參照基因，較佳地管家基因，優選地為RPPH1的擴增區域，其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產品：

矢野氏鞘氨單胞菌IL-6R (Interleukin 6 Receptor) ELISA Kit拉丁屬名: Sphingomonas yanoikuyae

云芝栓孔菌 (變色栓菌)MIP-3β/ELC/CCL19 (Macrophage Inflammatory Protein 3β) ELISA Kit 拉丁屬名: Trametes versicolor

陰溝腸桿菌ACE (Angiotensin I Converting Enzyme) ELISA Kit拉丁屬名: Enterobacter cloacae

盤長孢狀刺盤孢HLA-A (Leukocyte Antigen A) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

大腸埃希菌CYTH1 (Cytohesin 1) ELISA Kit 拉丁屬名: coli

被孢霉屬INSR (Insulin Receptor) ELISA Kit用途: 松茸附生菌

食物中殼成分速測卡GP39 (Glycoprotein 39, Cartilage) ELISA Kit規格: 8次測定用量

空腸彎曲桿菌OSMR (Oncostatin M Receptor) ELISA Kit拉丁屬名: jejuni

橘青霉RND1 (Rho Family GTPase 1) ELISA Kit拉丁屬名: Penicillium citrinum Thom

毛柄金錢菌(金針菇)SSRP1 (Structure Specific Recognition Protein 1) ELISA Kit用途: 食藥用

大腸埃希氏菌PAR3 (Protease Activated Receptor 3) ELISA Kit 拉丁屬名: Escherichia coli

干酪乳桿菌Bax (Bcl-2 Associated X Protein) ELISA Kit拉丁屬名: Lactobacillus casei

雜色曲霉NUP155 (Nucleoporin 155kDa) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus versicolor

鉛色青霉TLA (Thymus Leukemia Antigen) ELISA Kit拉丁屬名: Penicillium  lividum

大麗輪枝孢MCP-4/CCL13 (Monocyte Chemotactic Protein 4) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用
絮狀表皮癬菌探針法熒光定量PCR試劑盒規格PEF1  調亡誘導因子家族蛋白PEF1抗體伽升沃 D9H-Xanthen-9-one,1,3,6-trihydroxy-8-(3-hydroxy-3-methylbutyl)-7-methoxy-2-(3-methyl-2-buten-1-yl)-中藥標準品  分 子 式: C24H28O7 分 子 量: 428.47492

PHAPI2/APRIL  酸性核磷蛋白32家族B抗體酪醇2-(4-Hydroxyphenyl)ethanol中藥標準品  分 子 式: C8H10O2 分 子 量: 138.1638

DRAK1/STK17A  絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶17A抗體（DAP凋亡誘導蛋白激酶1）當藥醇苷9H-Xanthen-9-one, 8-(b-D-glucopyranosyloxy)-1,5-dihydroxy-3-methoxy-中藥標準品  分 子 式: C20H20O11 分 子 量:

ERN2  內質網核信號轉導蛋白2抗體Alpha-軟脂酸香樹精酯alpha-Amyrin palmitate中藥標準品  分 子 式: C46H80O2 分 子 量: 665.1262

A1BG  α1B糖蛋白抗體醋酸獨活屬醇7H-Furo[3,2-g][1]benzopyran-7-one,9-[[(4R)-2,2,5,5-tetramethyl-1,3-dioxolan-4-yl]methoxy]-對照藥材 分 子 式: C19H20O6 分 子 量: 344.3585

A1CF/Apo B RNA editing protein  載脂蛋白B-mRNA編碼蛋白抗體ent-16α17-二羥基貝殼杉烷-18-羧酸16,17-dihydroxy-ent-kauran-19-oic acid化學標準品 分 子 式: C20H32O4 分 子 量: 336.466

FASTKD1  Fas活化激酶結構域蛋白1抗體Tris-EDTA抗原修復液(10×,pH9.0)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量: