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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應鑒定——PCR反應條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規參照基因，較佳地管家基因，優選地為RPPH1的擴增區域，其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產品：

膠孢CASP14 (Caspase 14) ELISA Kit用途: 植物病原物，用于種群的遺傳學研究和炭疽病害的診斷和防治

米氏假單胞菌RXFP1 (Relaxin/Insulin Like Family Peptide Receptor 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Pseudomonas  migulae

假單胞菌GPIIb/IIIa (Platelet Membrane Glycoprotein IIb/IIIa) ELISA Kit用途: 在無機鹽培養基中添加100mg/L的倍硫磷，降解率達30%左右

纖細白僵菌PIGR/SC (Polymeric Immunoglobulin Receptor/Membrane Secretory Component) ELISA Kit用途: 生防

艾比湖嗜鹽堿紅菌CTNNα1 (Catenin, Alpha 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Natronorubrum aibiense

蘇云金芽孢桿菌ECFR (Eosinophil Chemotactic Factor Receptor) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus  thuringiensis

PseudomonasMEC/CCL28 (Mucosae Associated Epithelia Chemokine) ELISA Kit拉丁屬名: Pseudomonas  kunshanensis sp/ Nov/

慶豐鏈霉菌LIFR (Leukemia Inhibitory Factor Receptor) ELISA Kit 用途: 對水稻稻瘟病有防治效果

Rummeliibacillus stabekisiiCLC (Charcot Leyden Crystal Protein) ELISA Kit拉丁屬名: Rummeliibacillus stabekisii

黑木耳MAG (Myelin Associated Glycoprotein) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

枯草芽孢桿菌11-DH-TXB2 (11-Dehydro-thromboxane B2) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus subtilis

華根霉AFA (Anti-Filaggrin Antibody) ELISA Kit拉丁屬名: Rhizopus chinensis

金黃色葡萄球菌*Flt3 (FMS Like Tyrosine Kinase 3) ELISA Kit拉丁屬名: Staphylococcus aureus Rosenbach

杏鮑菇PCP (Procollagen C Peptidase) ELISA Kit用途: 試驗栽培

銅綠假單胞菌(綠膿桿菌)αHBDH (α-Hydroxybutyrate Dehydrogenase) ELISA Kit拉丁屬名: Pseudomonas aeruginosa(Schroeter) Migula
山羊附紅細胞體探針法熒光定量PCR試劑盒供應商PNPLA6/NTE  含patatin樣磷脂酶6抗體氧化白藜蘆醇Oxyresveratrol中藥標準品  分 子 式: C14H12O4 分 子 量: 244.24

OTC  鳥氨酸氨基甲酰轉移酶抗體遼東楤木皂苷XAraloside X中藥標準品  分 子 式: C60H98O28 分 子 量: 1266

Desmoglein 1/DSG1  橋粒芯糖蛋白1氯化銨溶液(5mol/L)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

CAMKIV/CAMK4  鈣/鈣調蛋白依賴性蛋白激酶4抗體植酸鈣myo-Inositol,1,2,3,4,5,6-hexakis(dihydrogen phosphate), calcium salt (1:6)中藥標準品  分 子 式: C6H6O24P6-12.6[Ca+2] 分 子 量: 888.408240000001

phospho-CAMK4(Thr196 + Thr200)  磷酸化鈣/鈣調蛋白依賴性蛋白激酶4抗體9,10-二甲氧基鐵屎米酮9,10-Dimethoxycanthin-6-one化學標準品 分 子 式: C16H12N2O3 分 子 量: 280.278

LBP1/Upstream Binding Protein 1  上游結合蛋白1抗體胡椒堿Piperine中藥標準品  分 子 式: C17H19NO3 分 子 量: 285.34

SDF4  基質細胞衍生因子4抗體（鈣結合蛋白）四氫黃連堿Tetrahydrocoptisine中藥標準品  分 子 式: C19H17NO4 分 子 量: 323.34258