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客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

大麗輪枝霉PKBG (Protein Kinase B Gamma) ELISA Kit 拉丁屬名: Verticillium dahliae Kleb

魯氏接合酵母PKB (Protein Kinase B) ELISA Kit拉丁屬名: Zygosaccharomyces  rouxii

枯草芽孢桿菌PKCB1 (Protein Kinase C Beta 1) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus subtilis

白鮑魚菇PKCD (Protein Kinase C Delta) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

米曲霉PKCE (Protein Kinase C Epsilon) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus oryzae

稀奇鏈霉菌PKCG (Protein Kinase C Gamma) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces paradoxus

白色假絲酵母*PKCI (Protein Kinase C Iota) ELISA Kit拉丁屬名: Candida albicans (Robin) Berkhout

小刺青霉PKCq (Protein Kinase C Theta) ELISA Kit 拉丁屬名: Penicillium spinulosum

薄層菌PKCZ (Protein Kinase C Zeta) ELISA Kit 拉丁屬名: Hymenobacter sp.

細(xì)疣籃狀菌PKC (Protein Kinase C)ELISA Kit拉丁屬名: Talaromyces verruculosus

亮白曲霉PKD1 (Protein Kinase D1) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

金龜子綠僵菌PKD2 (Protein Kinase D2) ELISA Kit 拉丁屬名: Metarhizium anisopliae

蠟狀芽孢桿菌PKIA (Protein Kinase Inhibitor Alpha) ELISA Kit 用途: 害蟲生物防治

折疊馬賽菌PKIB (Protein Kinase Inhibitor Beta) ELISA Kit 拉丁屬名: Massilia plicata

棘孢木霉PKIG (Protein Kinase Inhibitor Gamma) ELISA Kit拉丁屬名: Trichoderma  asperellum
貝氏隱孢子蟲探針法熒光定量PCR試劑盒說明書RERG  Ras相關(guān)雌激素調(diào)節(jié)生長抑制蛋白芹菜素-6-C-葡萄糖-8-C-木糖苷Vicenin III化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式: C26H28O14 分 子 量: 564.49212

RHOBTB1  Rho相關(guān)結(jié)構(gòu)域BTB蛋白質(zhì)1抗體Β-香樹脂酮醇Olean-12-en-11-one, 3-hydroxy-, (3b)-對照藥材 分 子 式: C30H48O2 分 子 量: 440.70092

RIL  基因PDLIM4抗體細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白提取試劑盒標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

RIN1  RAS抑制蛋白1抗體短葉松素4H-1-Benzopyran-4-one,2,3-dihydro-3,5,7-trihydroxy-2-phenyl-, (2R,3R)-對照藥材 分 子 式: C15H12O5 分 子 量: 272.25278

RND3/RHOE  Rho家族GTP酶3抗體靈芝酸C6Ganoderic acid C6化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 分 子 式:  分 子 量:

RSRC2  蛋白抗體菜油甾醇Ergost-5-en-3-ol, (3尾,24R)-中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C28H48O 分 子 量: 400.68012

PARG1/Rho GTPase activating protein 29  Rho GTP酶激活蛋白29抗體丹參新酮3,4-Phenanthrenedione,5,6,7,8-tetrahydro-8,8-dimethyl-2-(1-methylethyl)-中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C19H22O2 分 子 量: 282.37678