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PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

客戶只需提供樣品和待檢測(cè)名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。步驟(2)為：待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。

其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

冷溫木拉克酵母Pg (Progesterone) ELISA Kit拉丁屬名: Mrakia frigida

枯草芽孢桿菌PGR (Progesterone Receptor) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus subtilis

蠟狀芽孢桿菌FSTL1 (Follistatin Like Protein 1) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus  cereus

蘇云金芽孢桿菌PHB (Prohibitin) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus  thuringiensis

束狀刺盤孢*PI (Proinsulin) ELISA Kit拉丁屬名: Colletotrichum dematium (Persoon :Fries) Grove

白被黑蛋巢PK2 (Prokineticin 2) ELISA Kit 拉丁屬名: Cyathus pallidus

擬囊體側(cè)耳、(鮑魚菇)PKR1 (Prokineticin Receptor 1) ELISA Kit拉丁屬名: Pleurotus cystidiosus  Miller

辣椒枯萎PCNA (Proliferating Cell Nuclear Antigen) ELISA Kit拉丁屬名: Fusarium oxysporum

紅大耳GZMK (Granzyme K) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

釀酒酵母PRCP (Prolylcarboxypeptidase) ELISA Kit 拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae

紅色瑞恩氏酵母PGD2S (Prostaglandin D2 Synthase, Brain) ELISA Kit拉丁屬名: Ruinenia rubra

雞傷寒沙門氏菌EP2 (Prostaglandin E Receptor 2) ELISA Kit拉丁屬名: gallinarum

秦氏蜜環(huán)菌PTGES2 (Prostaglandin E Synthase 2) ELISA Kit 注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

丁香假單胞桿菌番茄致種*PTGES (Prostaglandin E Synthase, Microsomal) ELISA Kit 注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或，非藥用，非食用

紅硬囊果青霉NRG-1 (Neuregulin 1) ELISA Kit拉丁屬名: Penicillium rubidurum
刺激隱核蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 MTSS1  轉(zhuǎn)移抑制蛋白1根皮苷Phlorizin中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C21H24O10 分 子 量: 436.41

MTUS1/Angiotensin II Type 2 Receptor  緊張素Ⅱ2型受體相互作用蛋白抗體焦亞硫酸鈉溶液(100×)標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

NIT1  腈水解酶1抗體蕊木堿甲酯Methyl chanofruticosinate對(duì)照藥材 分 子 式:  分 子 量:

RASSF3  Ras相關(guān)區(qū)域家族1A抗體咖啡酸二十二酯Docosyl 3-(3,4-dihydroxyphenyl)acrylate對(duì)照藥材 分 子 式: C31H52O4 分 子 量: 488.74218

NPR2L/G21 protein  G21蛋白質(zhì)抗體瓦來薩明堿 N-氧化物2,5-Ethano-2H-azocino[4,3-b]indole-6-carboxylicacid, 4-ethylidene-1,3,4,5,6,7-hexahydro-6-(hydroxymethyl)-, methyl ester,2-oxide, [5S-(4E,*,6b)]- (9CI)對(duì)照藥材 分 子 式: C20H24N2O4 分 子 量:

XAB2/SYF1  XAB2蛋白抗體蘋果酸DL-Malic acid中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C4H6O5 分 子 量: 134.08744

PDGFRL  血小板源性生長(zhǎng)因子受體β樣蛋白抗體甘草查爾酮C2-Propen-1-one,3-[4-hydroxy-2-methoxy-3-(3-methyl-2-buten-1-yl)phenyl]-1-(4-hydroxyphenyl)-,(2E)-中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C21H22O4 分 子 量: 338.39698