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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應鑒定——PCR反應條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規參照基因，較佳地管家基因，優選地為RPPH1的擴增區域，其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。
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海洋沉積物芽孢桿菌CKLF (Chemokine Like Factor) ELISA Kit 拉丁屬名: Bacillus oceanisediminis

漢遜德巴利酵母漢遜變種CKLFSF4 (Chemokine Like Factor Superfamily 4) ELISA Kit 拉丁屬名: Debaryomyces hansenii var. hansenii

匍枝根霉(黑根霉)CKLFSF5 (Chemokine Like Factor Superfamily 5) ELISA Kit拉丁屬名: Rhizopus stolonifer

天門冬素紫色鏈霉菌CKLFSF6 (Chemokine Like Factor Superfamily 6) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces asparaginoviolaceus

褐孢霉菌*CKLFSF7 (Chemokine Like Factor Superfamily 7) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

皺褶假絲酵母CKLFSF10 (Chemokine Like Factor Superfamily 10) ELISA Kit拉丁屬名: Candida rugosa

芽孢桿菌屬CCKAR (Cholecystokinin A Receptor) ELISA Kit 拉丁屬名: Bacillus  sp.

嗜熱脂肪地芽孢桿菌CETP (Cholest Erolester Transfer Protein) ELISA Kit拉丁屬名: Geobacillus  stearothermophilus

大腸桿菌AGT (Angiotensinogen) ELISA Kit用途: 教學科研，用于研究鄰苯二酚1,2-雙加氧酶基因

石蠟節桿菌CH (Cholesterol) ELISA Kit拉丁屬名: Arthrobacter paraffineus

蜂房哈夫尼菌CHRM2 (Cholinergic Receptor, Muscarinic 2) ELISA Kit 拉丁屬名: Hafnia alvei

釀酒酵母CG (Chorionic Gonadotrophin) ELISA Kit拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

卷曲乳桿菌*CHD3 (Chromodomain Helicase DNA Binding Protein 3) ELISA Kit拉丁屬名: Lactobacillus  crispatus

枯草芽孢桿菌CHD5 (Chromodomain Helicase DNA Binding Protein 5) ELISA Kit 拉丁屬名: Bacillus subtilis

直立共養單胞菌CHGA (Chromogranin A) ELISA Kit 拉丁屬名: Syntrophomonas erecta
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TIMP-1(CT)  金屬蛋白酶組織抑制因子-1抗體（C端）電解脫鈣液(甲酸法)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

Adducin protein  內收蛋白抗體白花前胡醇2H-1-Benzopyran-2-one,6-[(2R)-2,3-dihydroxy-3-methylbutyl]-7-methoxy-中藥標準品  分 子 式: C15H18O5 分 子 量: 278.30

phospho-c-Jun(Thr91+Thr93)  磷酸化原癌基因c-Jun抗體草酸水溶液(2%)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

Gibberellins  抗赤霉素抗體（Z）-阿枯米定堿Sarpagan-16-carboxylicacid, 17-hydroxy-, methyl ester, (19Z)-對照藥材 分 子 式: C21H24N2O3 分 子 量:

phospho-AQP2(Ser264/261)  磷酸化水通道蛋白2抗體續斷苷BDipsanoside B化學標準品 分 子 式:  分 子 量:

Mycobacterium bovis  牛結核桿菌菌體蛋白抗體D-Hanks平衡鹽粉劑(1×,無酚紅)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量: