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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應鑒定——PCR反應條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

魯毛霉NXF1 (Nuclear RNA Export Factor 1) ELISA Kit  拉丁屬名: Mucor rouxianus

大腸埃希氏菌NUP35 (Nucleoporin 35kDa) ELISA Kit  拉丁屬名: Escherichia coli

單格孢NUP37 (Nucleoporin 37kDa) ELISA Kit  注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

大腸埃希菌NUP50 (Nucleoporin 50kDa) ELISA Kit  拉丁屬名: coli

丘陵假絲酵母NUP85 (Nucleoporin 85kDa) ELISA Kit  拉丁屬名: Candida colliculosa

釀酒酵母NUP98 (Nucleoporin 98kDa) ELISA Kit  拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

昆明腐霉NUP107 (Nucleoporin 107kDa) ELISA Kit  拉丁屬名: Pythium kunmingense

瑞士乳桿菌NUP133 (Nucleoporin 133kDa) ELISA Kit  拉丁屬名: Lactobacillus helveticus

產(chǎn)蛋下降綜合征病毒NUP153 (Nucleoporin 153kDa) ELISA Kit  拉丁屬名: Egg       drop syndrome virus

毛革蓋菌NUP155 (Nucleoporin 155kDa) ELISA Kit  注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

尖孢鐮孢NUP160 (Nucleoporin 160kDa) ELISA Kit  拉丁屬名: Fusarium oxysporum

葡萄座腔菌屬NUP188 (Nucleoporin 188kDa) ELISA Kit  注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

毛霉NUP205 (Nucleoporin 205kDa) ELISA Kit  注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

淺藍灰曲霉NUP214 (Nucleoporin 214kDa) ELISA Kit  拉丁屬名: Aspergillus caesiellus

BacillusOBTF1 (Octamer Binding Transcription Factor 1) ELISA Kit  拉丁屬名: Bacillus  sp.
捻轉(zhuǎn)毛細線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒說明書Tyrosinase  酪氨酸酶(多肽抗原)(S型)人參皂苷Rh2Ginsenoside Rh2中藥標準品  分 子 式: C36H62O8 分 子 量: 622.87

OAT4L又稱URAT1 (Urate Transporter 1)  尿酸鹽重吸收轉(zhuǎn)運子1 (抗原)異苦參酮2'-methoxy-5,7,4'-trihydroxy-8-lavandulylflavanone化學標準品 分 子 式: C26H30O6 分 子 量: 438.5128

VAP1(vascular adhesion protein 1)  粘附蛋白1（多肽抗原）連翹苷phillyrin中藥標準品  分 子 式: C27H34O11 分 子 量: 534.55

Vimentin  波形蛋白（抗原）丹參二醇A(6S)-6,7,8,9-Tetrahydro-6-hydroxy-6-hydroxymethyl-1-methylphenanthro[1,2-b]furan-10,11-dione化學標準品 分 子 式: C18H16O5 分 子 量: 312.31664

VSIG4 (V-set and immunoglobulin domain-containing protein 4)  VSIG4 T淋巴細胞負調(diào)節(jié)蛋白之一（抗原）石杉堿甲Huperzine A化學標準品 分 子 式: C15H18N2O 分 子 量: 242.31622

WNK4(Ser/Thr-protein kinase WNK4; protein kinase with no lysine 4; protein kinase, lysine –dficient 4)  一種新的絲氨酸/蘇氨酸激酶家族成員的基因WNK4（多肽抗原）丹參酸甲酯化學標準品 分 子 式:  分 子 量:

ZNF300 (zinc finger protein ZNF300)- middle  鋅指蛋白300(抗原)3-O-阿魏酰奎尼酸(1S,3S,4S,5S)-1,3,4-trihydroxy-5-{[(2E)-3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)prop-2-enoyl]oxy}cyclohexanecarboxylic acid化學標準品 分 子 式: C17H20O9 分 子 量: 368.3353