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PCR反應鑒定——PCR反應條件:

客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據分析，提供實驗報告給您。

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質粒載體為本領域常規(guī)質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下列是公司正在熱銷的產品：

鏈格孢菌HSP-27 (heat shock protein 27) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

橙色桿孢囊菌HSP-40 (Heat Shock Protein 40) ELISA Kit拉丁屬名: Virgisporangium aurantiacum

大腸桿菌HSP-60 (Heat Shock Protein 60) ELISA Kit拉丁屬名: Escherichia coli

長枝木霉HSP-70 (Heat Shock Protein 70) ELISA Kit拉丁屬名: Trichoderma  longibrachiatum

馬來西亞鏈霉菌HSP-90 (Heat Shock Protein 90) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces malaysiensis

平菇HSP gp96 (Heat Shock Protein glycoprotein 96) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

產氣莢膜梭菌 毒素C型HSF2 (Heat Shock Transcription Factor 2) ELISA Kit  拉丁屬名: perfringens Type C

微桿菌SHH (Hedgehog Homolog, Sonic) ELISA Kit  拉丁屬名: Microbacterium sp.

納西桿菌HHIP (Hedgehog Interacting Protein) ELISA Kit  拉丁屬名: Naxibacter sp.

赤褐鵝膏菌HLTF (Helicase Like Transcription Factor) ELISA Kit  注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

大腸埃希氏桿菌MMP-3 (Matrix Metalloproteinase 3) ELISA Kit 拉丁屬名: Escherichia  coli

玫瑰色考克氏菌MMP-9 (Matrix Metalloproteinase-9) ELISA Kit拉丁屬名: Kocuria rosea

平菇(黑平1號)Pro-MMP-9 (Pro-Matrix Metalloproteinase-9) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

褐囊蜜環(huán)菌OPN (Osteopontin) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

乙酰微小桿菌PDGF-AA (Platelet-Derived Growth Factor-AA) ELISA Kit 拉丁屬名: Exiguobacterium acetylicum
念珠菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格IL-8  白介素8（白細胞介素-8）(抗原)山芝烯三醇Serratriol對照藥材 分 子 式:  分 子 量:

Insulin Receptor(ISR)  受體（抗原）薯蕷皂苷元-3-O-β-D-木糖-(1→3) -β-D-葡萄糖苷中藥標準品  分 子 式:  分 子 量:

Integrin Alpha 4/ITGA4(Integrin alpha 4)  整合素-α（抗原）黃獨素BDiosbulbin B中藥標準品  分 子 式: C19H20O6 分 子 量: 344.3585

LDL-R(Low-density lipoprotein receptor precursor)  受體(抗原)PAGE不連續(xù)凝膠電泳緩沖液(5×)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

Ki-67 peptides  Ki-67 Antigen(多肽抗原)20S,24R-環(huán)氧基-達馬樹脂-12,25-二醇-3-酮Dammaran-3-one,20,24-epoxy-12,25-dihydroxy-, (12b,24R)- (9CI)對照藥材 分 子 式: C30H50O4 分 子 量: 474.7156

Kiss-1(Metastasis-suppressor KiSS-1 precursor)  轉移抑制基因（抗原)蔗糖-PBS溶液(20%)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

重組K3蛋白  重組K3蛋白駱駝蓬堿Harmaline對照藥材 分 子 式: C13H14N2O 分 子 量: 214.26