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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應鑒定——PCR反應條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質粒載體為本領域常規(guī)質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產品：

Sphingobium amienseEPCAM (Epithelial Cell Adhesion Molecule) ELISA Kit  拉丁屬名: Sphingobium amiense

大豆慢生根瘤菌ENA-78 (Epithelial Neutrophil Activating Peptide 78) ELISA Kit用途: 耐受pH4.2

粘質沙雷氏菌EPOR (Erythropoietin receptor) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

藤黃微球菌UCP-2 (Uncoupling Protein 2, Mitochondrial) ELISA Kit拉丁屬名: Micrococcus luteus

毛栓孔菌SELE (E-Selectin) ELISA Kit 拉丁屬名: Trametes hirsuta

糙孢籃狀菌ER (Estradiol Receptor) ELISA Kit拉丁屬名: Talaromyces trachyspermus

大球蓋菇ERα (Estrogen Receptor Alpha) ELISA Kit  用途: 食用

韓國鞘氨單胞菌EIF3A (Eukaryotic Translation Initiation Factor 3A) ELISA Kit  拉丁屬名: Sphingomonas  koreensis

*正紅菇ECM1 (Extracellular Matrix Protein 1) ELISA Kit  注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

釀酒酵母ERK1 (Extracellular Signal Regulated Kinase 1) ELISA Kit  拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

多汁乳菇ERK2 (Extracellular Signal Regulated Kinase 2) ELISA Kit  注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

淺黃微桿菌FVIIIAg (Factor VIII-related Antigen) ELISA Kit拉丁屬名: Microbacterium flavescens

榛針孢酵母BF (factor B) ELISA Kit 拉丁屬名: Nematospora  coryli

腸膜明串珠菌腸膜亞種FAS/CD95 (Factor Related Apoptosis) ELISA Kit拉丁屬名: Leuconostoc  mesenteroides subsp.mesenteroides

乳桿菌屬FSCN (Fascin) ELISA Kit  拉丁屬名: Lactobacillus  sp.
空腸彎曲桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Connexin-43(Cx43)  間隙連接蛋白43(多肽片斷抗原)新甘草苷Neoliquiritin化學標準品 分 子 式: C21H22O9 分 子 量: 418.39398

Connexin-45(CX45)  間隙連接蛋白45(抗原)華蟾毒它靈Cinobufotalin中藥標準品  分 子 式: C26H34O7 分 子 量: 458.54

Anti-Collagen II  II 型膠原(抗原)3β，7α-二羥-豆甾-5-烯Stigmast-5-ene-3,7-diol,(3b,7a)-對照藥材 分 子 式: C29H50O2 分 子 量: 430.7061

CXCR1 (CXC-chemokine receptor 1)  細胞表面趨化因子受體1抗原Hanks平衡鹽粉劑(1×HBSS,無酚紅)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

COX-2 (Prostaglandin-endoperoxide synthase-2)  素氧化環(huán)化酶2(抗原)芥子酸3-(4-Hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)acrylic acid脂肪酸類 分 子 式: C11H12O5 分 子 量: 224.20998

c-phycocyanin(C-PC)  C-藻藍素(藻藍蛋白)7-乙氧基莫諾苷7-O-Ethylmorroniside中藥標準品  分 子 式: C19H30O11 分 子 量: 434.4349

CTGF (connective tissue growth factor)  結締組織生長因子(多肽抗原)去氫荷葉堿化學標準品 分 子 式:  分 子 量: