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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應鑒定——PCR反應條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規參照基因，較佳地管家基因，優選地為RPPH1的擴增區域，其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產品：

蘇云金芽孢桿菌DAP6 (Death Associated Protein 6) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

淡青鏈霉菌TACR1 (Tachykinin Receptor 1) ELISA Kit 拉丁屬名: Streptomyces glaucescens

香菇TACR2 (Tachykinin Receptor 2) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

黃色短桿菌TACR3 (Tachykinin Receptor 3) ELISA Kit拉丁屬名: Brevibacterium  flavum

三葉草根瘤菌Anti-MPO (Anti-Myeloperoxidase Antibody) ELISA Kit用途: 與三葉草共生固氮

大腸埃希氏菌PLP1 (Proteolipid Protein 1, Myelin) ELISA Kit 拉丁屬名: Escherichia  coli

果生鏈核盤菌MyD88 (Myeloid Differentiation Factor 88) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

ParacoccusPOT1 (Protection of Telomeres Protein 1) ELISA Kit拉丁屬名: Paracoccus

異常漢遜酵母HBF (Fetal Hemoglobin) ELISA Kit拉丁屬名: Hansenula anomala (Hansen) H. et P. Sydow

露濕漆斑菌PR3 (Proteinase 3) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

玫瑰色紅球菌PL (Placental Lactogen) ELISA Kit拉丁屬名: Rhodococcus rhodochrous

巨獸芽孢桿菌PP (Placental Protein) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus megaterium

鏈球菌PP13 (Placental Protein13) ELISA Kit拉丁屬名: Streptococcus pneumonia

地衣芽孢桿菌PP14 (Placental Protein14) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus licheniformis

清酒假絲酵母PRI (Placental Ribonuclease Inhibitor) ELISA Kit拉丁屬名: Candida sake
海藻百伯史坦菌探針法熒光定量PCR試劑盒供應商HLA-E  人類白細胞抗原E戊唑醇Tebuconazole化學標準品 分 子 式: C16H22ClN3O 分 子 量: 307.82

Anti-HMGA1 (high mobility group AT-hook 1)  高遷移率族蛋白A1抗原麥冬苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基（1→2）-β-D-吡喃葡萄糖苷Ophiogenin-3-O-α-L-rhaMnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside中藥標準品  分 子 式:  分 子 量:

HMGA2 (high mobility group A2)  高遷移率族蛋白A2抗原洛莫司汀1-(2-Chloroethyl)-3-cyclohexyl-1-nitrosourea其它化學試劑 分 子 式: C9H16N3O2Cl 分 子 量: 233.69524

HO-1/HSP32 (Hemeo xygenase 1)  血紅素氧合酶-1/熱休克蛋白-32抗原P:C:I(125:24:1,pH﹤5.0)標準滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

HO-1/HSP32(Hemeo xygenase 1)  血紅素氧合酶-1/熱休克蛋白-32抗原鬼臼毒素-4-O-葡萄糖苷Furo[3',4':6,7]naphtho[2,3-d]-1,3-dioxol-6(*H)-one,9-(b-D-glucopyranosyloxy)-5,8,8a,9-tetrahydro-5-(3,4,5-trimethoxyphenyl)-,(5R,*R,8aR,9R)-中藥標準品  分 子 式: C28H32O13 分 子 量: 576.54588

HO-2(Heme oxygenase 2)  血紅素氧合酶-2抗原苯甲醛Benzaldehyde中藥標準品  分 子 式: C7H6O 分 子 量: 106.12194

phospho-HP1/heterochromatin protein 1 (pTyr24)(fruit fly)  異染色質蛋白1(磷酸化多肽)毛兩面針素Toddaline中藥標準品  分 子 式: C16H20O6 分 子 量: 308.3264