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客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

聚生殼菌GPC3 (Glypican 3) ELISA Kit 注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

迪吉氏黃桿菌GPC4 (Glypican 4) ELISA Kit 拉丁屬名: Flavobacterium  degerlachei

臺灣芽孢桿菌PS (Phosphatidylserine) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus taiwanensis

病研所芽孢桿菌PLTP (Phospholipid Transfer Protein) ELISA Kit 拉丁屬名: Bacillus idriensis

耐冷類諾卡氏菌PLC (Phospholipase C) ELISA Kit拉丁屬名: Nocardioides psychrotolerans

紅細(xì)菌屬PLCγ1 (Phospholipase C Gamma 1) ELISA Kit拉丁屬名: 16SrDNA序列收錄號：FJ161219，桿狀，在光照厭氧和黑暗好氧條件下均可生長，產(chǎn)生粘液，可同化硫酸鹽，硫化氫氧化產(chǎn)物為S0，可利用硝酸鹽做電子受體，能利用半乳糖、甘露為碳源 sp.

球孢白僵菌PLCβ1/PI-PLC (Phospholipase C Beta 1, Phosphoinositide Specific) ELISA Kit用途: 昆蟲防治研究

 酪丁酸梭菌DNAFUR (Furin) ELISA Kit 規(guī)格: 濃度為100ng/μL的DNA100μL=10μg

橄欖產(chǎn)色鏈霉菌SCCA1 (Squamous Cell Carcinoma Antigen 1) ELISA Kit  拉丁屬名: Streptomyces olivochromogenes

簡青霉SCCA2 (Squamous Cell Carcinoma Antigen 2) ELISA Kit 拉丁屬名: Penicillium simplicissimum

Streptococcus sanguinispPLA2 (Phospholipase A2, Pancreas) ELISA Kit拉丁屬名: Streptococcus sanguinis

異常威克漢姆酵母DS (Dermatan Sulfate) ELISA Kit拉丁屬名: Wickerhamomyces anomalus

山東糖多孢菌MS (Melatonin Sulfate) ELISA Kit拉丁屬名: Saccharopolyspora shandongensis

水稻腸桿菌Trx (Thioredoxin) ELISA Kit拉丁屬名: Enterobacter oryzae

擬康氏木霉TrxR1 (Thioredoxin Reductase 1) ELISA Kit注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用
擬桿菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格F1 operon positive regulatory protein(NT)  耶爾森氏菌F1莢膜蛋白(N端多肽）青陽參苷元BPregn-5-en-20-one,3-[(O-2,6-dideoxy-3-O-methyl-b-D-arabino-hexopyranosyl-(1®4)-O-2,6-dideoxy-3-O-methyl-b-D-ribo-hexopyranosyl-(1®4)-2,6-dideoxy-3-O-methyl-b-D-ribo-hexopyranosyl)oxy]-12-[[(2E)-3,4-dimethyl-1-oxo-2-pentenyl]oxy]-8,14,17-trihydroxy-,(3b,12b,14b,17a)- (9CI)中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C49H78O16 分 子 量:

F1 operon positive regulatory protein(CT)  耶爾森氏菌F1莢膜蛋白(C端多肽）氧化槐果堿oxysophocarpine中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C15H22N2O2 分 子 量: 262.35

FABP(brain) (Fatty acid-binding protein brain)  腦型脂肪酸結(jié)合蛋白抗原半翅鹽膚木內(nèi)酯Semialactone對照藥材 分 子 式:  分 子 量:

FADD (Fas-associated protein with death domain)  Fas死亡結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白抗原脫氧膽酸鈉（牛）sodium 3-α,12-α-dihydroxy-5-β-cholan-24-oate中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C24H39NaO4 分 子 量: 414.56

FAK(Focaladhesin kinase)  粘著斑激酶抗原DEPC-PBS溶液(活躍)標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

phospho-FAK(pTyr577)  磷酸化粘著斑激酶抗原氯化鈣溶液(2.5mol/L,無菌)標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

phospho-FAK(pSer732)(phospho-Focal adhesion kinase)  磷酸化粘著斑激酶抗原苦參新醇 FKushenol F中藥標(biāo)準(zhǔn)品  分 子 式: C25H28O6 分 子 量: 424.48622