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PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

大腸埃希氏菌NEF3 (Neurofilament 3) ELISA Kit拉丁屬名: Escherichia coli

無殼異擔(dān)子菌NEFL (Neurofilament, Light Polypeptide) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

黑曲霉NOS1/nNOS (Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

黃桿菌屬C-jun (V-Jun Sarcoma Virus 17 Oncogene Homolog) ELISA Kit拉丁屬名: Flavobacterium  fnyxellicola

豌豆根瘤菌CC16 (Clara Cell 16kD protein) ELISA Kit 用途: 固氮

河生腸桿菌生物Ⅰ型CLDN1 (Claudin 1) ELISA Kit 拉丁屬名:  Lelliottia amnigena

美澳型核果褐腐病菌CLDN14 (Claudin 14) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

白乳菇CD109 (Cluster of Differentiation 109) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

大腸埃希菌CD30 (Cluster of Differentiation 30) ELISA Kit拉丁屬名: coli

固氮菌CD97 (Cluster of Differentiation 97) ELISA Kit 用途: 固氮。

葡萄座腔菌CD99 (Cluster of Differentiation 99) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

檸檬黃色紅色桿菌CD4 (Cluster of Differentiation 4) ELISA Kit拉丁屬名: Erythrobacter citreus

臺灣根霉NOS2/iNOS (Nitric Oxide Synthase 2, Inducible) ELISA Kit拉丁屬名: Rhizopus formosensis Nakazawa

煙色擬盤多毛孢CLDN3 (Claudin 3) ELISA Kit 拉丁屬名: Pestalotiopsis adusta

假單胞菌屬NOS3/eNOS (Nitric Oxide Synthase 3, Endothelial) ELISA Kit拉丁屬名: Pseudomonas  sp
莢膜阿耶羅菌探針法熒光定量PCR試劑盒說明書HCV-NS3  病毒-NS3（抗原）新魯斯可皂苷元Spirosta-5,25(27)-diene-1,3-diol,(1b,3b)-中藥標準品  分 子 式: C27H40O4 分 子 量: 428.6041

HCV-NS4a  病毒-NS4a（抗原）(-)-鷹爪豆堿7,14-Methano-2H,6H-dipyrido[1,2-a:1',2'-e][1,5]diazocine,dodecahydro-, (7S,7aS,14S,14aS)-化學(xué)標準品 分 子 式: C15H26N2 分 子 量:

HEV  病毒（抗原）β-香樹脂酮醇 乙酸酯Olean-12-en-11-one,3-(acetyloxy)-, (3b)-對照藥材 分 子 式: C11H7N2O3Scl 分 子 量: 282.70288

HGV(Hepatitis G vivus)  庚型肝炎病毒（抗原）紫云英苷Astragalin中藥標準品  分 子 式: C21H20O11 分 子 量: 448.38

HisX6  聚組氨酸標簽蛋白格列苯脲5-Chloro-N-(4-(N-(cyclohexylcarbamoyl)sulfamoyl)phenethyl)-2-methoxybenzamide中藥標準品  分 子 式: C23H28N3O5Scl 分 子 量: 494.00352

HIV gp120  病毒（抗原）絡(luò)石苷2(3H)-Furanone,4-[(3,4-dimethoxyphenyl)methyl]-3-[[4-(b-D-glucopyranosyloxy)-3-methoxyphenyl]methyl]dihydro-3-hydroxy-,(3S,4S)-中藥標準品  分 子 式: C27H34O12 分 子 量: 550.55166

HSP-60( Heat shock protein-60)  熱休克蛋白-60（抗原）松果菊苷echinacoside中藥標準品  分 子 式: C35H46O20 分 子 量: 786.73