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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR反應鑒定——PCR反應條件:

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規參照基因，較佳地管家基因，優選地為RPPH1的擴增區域，其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。
以下列是公司正在熱銷的產品：

雷蘑(青腿子)TSLP (Thymic Stromal Lymphopoietin ) ELISA Kit 拉丁屬名: Clitocybe gigantea

黃麻鏈霉菌PLAUR/uPAR (Plasminogen Activator, Urokinase Receptor) ELISA Kit拉丁屬名: Streptomyces corchorusii

地窖粉孢革菌VEGF-C (Vascular Endothelial Growth Factor C) ELISA Kit 拉丁屬名: Coniophora cerebella

洛格酵母VEGF-D (Vascular Endothelial Growth Factor D) ELISA Kit 拉丁屬名: Saccharomyces logos van laer et Denamur ex Jorgensen

松口蘑VEGFR-2/KDR (Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

嘴突凸臍蠕孢DBP (Vitamin D Binding Protein) ELISA Kit 用途: 研究

枯草芽孢桿菌INS (Insulin) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

萊比托游動球菌EMMPRIN/CD147 (Extracellular Matrix Metalloproteinase Inducer) ELISA Kit拉丁屬名: Planococcus rifietoensis

頂孢頭孢霉CD34 (Cluster Of Differentiation 34) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

地衣芽孢桿菌snRNP/Sm (Small Nuclear Ribonucleoprotein) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus  licheniformis

秦氏蜜環菌CYB5A (Cytochrome b5) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

香菇CGβ (Chorionic Gonadotropin Beta Polypeptide) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

葡萄座腔菌sOX40L (soluble OX40L) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

蘋果雙殼菌TAP (Transporter Associated with Antigen Processing) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

亮白曲霉BRAF (B-Raf Proto Oncogene Serine/Threonine Protein Kinase) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus  candidus
蠟狀芽孢桿菌33探針法熒光定量PCR試劑盒說明書DPPA2 (developmental pluripotency associated gene2)  多能發育相關基因2抗原環烯醚萜 BCyclopenta[c]pyran-4-carboxylicacid, 7-(acetyloxy)-1-(b-D-glucopyranosyloxy)-1,4a,5,6,7,7a-hexahydro-4a,5-dihydroxy-7-methyl-,methyl ester, (1S,4aR,5R,7S,7aS)-對照藥材 分 子 式: C19H28O13 分 子 量:

DR4/APO2/TRAILR1 (Death receptor 4)  死亡受體4抗原千層紙素Oroxylin中藥標準品  分 子 式: C16H12O5 分 子 量: 284.26

DR5/TNFRSF10B/CD262 (Death receptor 5)  細胞調亡素/死亡受體5抗原苦參醇WKushenol W化學標準品 分 子 式:  分 子 量:

DP-I/DSP(desmoplakin I )  橋粒斑蛋白1抗原血竭黃烷ADracoflavan A化學標準品 分 子 式: C49H46O10 分 子 量: 794.884

DVL1 (dishevelled 1)  蓬亂蛋白17,4'-二羥基黃酮7-Hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-4H-chromen-4-one化學標準品 分 子 式: C15H10O4 分 子 量: 254.2375

Dynamin 2(Anti-Human Dynamin-2 )  鳥苷三磷酸酶－發動蛋白2抗體含羞草素1(4H)-Pyridinepropanoicacid, a-amino-3-hydroxy-4-oxo-, (aS)-中藥標準品  分 子 式: C8H10N2O4 分 子 量: 198.176

Nadrin peptide  發育調節蛋白多肽抗原6-醛基異麥冬黃烷酮A6-Formylisoophiopogonanone A化學標準品 分 子 式: C19H16O7 分 子 量: 356.326